一、生物人工肝研究的若干新进展（论文文献综述）
赵煜松,曾海霞,孙卓[1]（2021）在《LC-MS/MS法测定甲磺酸萘莫司他有关物质》文中研究指明建立采用LC-MS/MS法定量测定甲磺酸萘莫司他中有关物质的测定方法。采用C18色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈（30:70）,以多反应离子监测模式进行监测,监测离子对m/z180→163（对-胍基苯甲酸甲磺酸盐）和187→170（6-脒基-2-萘酚甲磺酸盐）,采用特征离子丰度比进行定性,外标法定量。两种有关物质低、中、高三种浓度的平均回收率分别为Ⅰ:97.9%、99.9%、101.4%和Ⅱ:99.6%、98.3%、99.8%。
张少飞[2]（2018）在《大鼠原代肝细胞体外三维培养研究》文中认为本研究采用Seglen改良的两步门静脉胶原酶灌注法分离鼠肝细胞,密度梯度离心法制备鼠骨髓间充质干细胞,利用三维（Three-dimensional,3D）胶原支架实现肝细胞和骨髓间充质干细胞共培养,并与3D单一培养的肝细胞、2D共培养肝细胞-骨髓间充质干细胞和2D单一培养的肝细胞组进行比较。通过特异性免疫荧光抗体染色法鉴定了两种细胞,采用FDA/PI双染法分析了肝细胞的活力,ELISA方法分析肝细胞的白蛋白分泌能力和7乙氧基-O-脱乙基酶活性,Quanti ChromTM尿素测定试剂盒检测尿素合成能力,Promega-Glo TM试剂盒检测CYP450酶活性,RT-PCR法分析肝细胞特异性功能基因Cldn-3,Bsep,AFP,G6P和A1AT的mRNA水平。结果显示,3D共培养肝细胞表达特异性蛋白CK8,骨髓间充质干细胞表达特异性蛋白CD44,表明3D共培养肝细胞和骨髓间充质干细胞获得成功,且3D共培养的肝细胞各项指示均优于3D单一培养的肝细胞,更优于2D共培养和2D单一培养的肝细胞。3D共培养的肝细胞在第28天仅有少量细胞出现凋亡,标记特异性代谢能力的白蛋白分泌、尿素合成、7乙氧基-O-脱乙基酶和CYP2D6酶活性可持续到第2327天,肝细胞功能基因Cldn-3,Bsep,AFP,G6P和A1AT的mRNA水平亦可维持到第2327天;3D单一培养的肝细胞在第14 d可见少量凋亡细胞,28 d可见大量细胞凋亡,标记特异性代谢能力的白蛋白分泌、尿素合成、7乙氧基-O-脱乙基酶和CYP2D6酶活性也可持续到第2327天,但是与3D共培养组相比在每个时间点的水平更低,肝细胞功能基因Cldn-3,Bsep,AFP,G6P和A1AT的mRNA水平也可维持到第2327天,但其表达水平均低于3D共培养组;2D单一培养和2D共培养标记特异性代谢能力的白蛋白分泌、尿素合成、7乙氧基-O-脱乙基酶和CYP2D6酶活性仅仅可持续12周,且水平较低,其后便检测不到,肝细胞功能基因Cldn-3,Bsep,AFP,G6P和A1AT的mRNA水平仅仅在Cldn-3基因的表达方面,在第7d最高,随后降低,第15天时未检测到表达,其余均未检测到表达。
赵雪,展义臻,何瑾馨[3]（2008）在《仿生学研究现状及其在纺织上的应用》文中研究指明介绍了仿生学的概念、研究方法和仿生原理,重点讨论了仿生技术分类及其在纤维、织物、染色及服饰等纺织领域的应用,同时对仿生技术发展前景进行了展望。
黄其春[4]（2006）在《甜菜碱对肥育猪脂肪代谢及其关键酶基因表达的影响与机理研究》文中研究说明本课题以肥育猪为试验对象，通过饲养试验、屠宰试验、肝细胞体外培养，从生理生化、脂肪代谢相关的酶活性和部分关键酶（脂肪酸合成酶、线粒体肉碱脂酰转移酶Ⅰ）基因表达变化、生长激素脉冲分泌模式及其它相关激素水平等方面探讨了甜菜碱对肥育猪脂肪代谢的影响，旨在阐明甜菜碱改善肥育猪胴体组成的机理，为甜菜碱作为新型的营养再分配剂在养猪业上的应用提供科学依据。根据Genebank登录的猪脂肪酸合成酶（FAS）、肝型肉碱脂酰转移酶Ⅰ（L-CPTⅠ）、肌肉型肉碱脂酰转移酶Ⅰ（M-CPTⅠ）和内标β-actin基因序列设计引物，分别以皮下脂肪组织、肝脏和背最长肌mRNA为模板，经反转录和PCR反应，克隆得到了相应的FAS、L-CPTⅠ、M-CPTⅠ及内标β-actin的基因片断。对测序结果进行序列分析表明，得到的FAS、L-CPTⅠ、M-CPTⅠ及内标β-actin基因序列与Genebank登录的相应基因片断（登录号分别为AY183428、AF288789、AY181062和U07786）同源性分别为98.77％、99.59％、99.61％和99.27％。在此基础上，进一步探讨了PCR反应中适宜的退火温度、Mg2+浓度和循环次数，构建了适合相应基因序列的优化半定量RT-PCR法，以用于研究甜菜碱对肥育猪皮下脂肪组织FAS基因、肝脏和肌肉CPTⅠ基因mRNA表达量的影响。48头体重55kg左右的“杜洛克×斯格（15系×12／36系）”杂交肥育猪，按试验要求分成2组，每组设3个重复，每个重复8头，公母各半，分别饲喂添加0或1250mg／kg盐酸甜菜碱（以纯品计）的玉米-豆粕型饲粮。试验预试期7d，正验期42d。饲养期间，试验猪自由采食、饮水。饲养试验结束后，从试验组和对照组的每个重复中各选取体重90kg左右的试验猪2头（公母各半），共12头，饲喂相应饲料，1h后，分别耳静脉采血，试验于13：00至16：00，每隔15min采样一次，并分别制各血清，以研究甜菜碱对肥育猪生长激素（GH）脉冲分泌的影响。按常规方法进行屠宰，测定胴体组成，并采集血清、肝脏、肌肉和皮下脂肪样品，进行相关指标分析。肝细胞体外培养试验设终浓度为1 mmol／L肉碱、2 mmol／L甜菜碱、4 mmol／L甜菜碱、1 mmol／L肉碱+2 mmol／L甜菜碱、1 mmol／L肉碱+4 mmol／L甜菜碱及空白对照6个处理，每个处理设3个重复，分别测定培养48、96h时肝细胞线粒体CPTⅠ活性。饲养试验结果表明：添加甜菜碱（1250 mg／kg）使肥育猪日增重提高了5.5％（P＜0.05），采食量无显着影响（P＞0.05），料重比呈降低趋势（P＞0.05）。屠宰试验结果显示：添加甜菜碱（1250 mg／kg）明显改善了肥育猪的胴体组成，胴体瘦肉率提高了5.2％（P＜0.01），眼肌面积增大了17.6％（P＜0.01），胴体脂肪率和平均背膘厚分别降低了13.1％（P＜0.01）和10.3％（P＜0.05）。甜菜碱对肥育猪屠宰率、皮肤比率、骨骼比率、板油重无显着影响（P＞0.05）。肝脏和背最长肌样品分析表明：①添加甜菜碱（1250 mg／kg），肥育猪背最长肌粗脂肪含量提高了23.6％（P＜0.05），肝脏粗脂肪含量呈下降趋势（P＞0.05）。甜菜碱对肥育猪肝脏和背最长肌粗蛋白含量无显着影响（P＞0.05）。②甜菜碱使肥育猪肝脏游离肉碱含量、背最长肌酸不溶肉碱含量分别提高了19.5％（P＜0.05）和45.6％（P＜0.01）。而且，甜菜碱显着降低了肥育猪背最长肌线粒体CPTⅠ活性及其mRNA表达，两者分别降低了11.1％（P＜0.05）和14.6％（P＜0.05）。但甜菜碱对肝脏线粒体CPTⅠ活性及其mRNA表达未产生显着影响（P＞0.05）。另外，肥育猪肝脏和背最长肌线粒体CPTⅠ活性与CPTⅠmRNA表达量之间具有较好的相关性（相关系数分别为0.67和0.72，P＜0.05）。脂肪样品分析显示：添加甜菜碱（1250 mg／kg）使肥育猪皮下脂肪组织脂肪生成酶、激素敏感脂酶、脂蛋白脂酶活性发生了显着变化。与对照组相比，试验组皮下脂肪组织激素敏感脂酶活性提高了15.1％（P＜0.05），FAS、乙酰-CoA羧化酶、苹果酸脱氢酶及脂蛋白脂酶的活性分别降低了18.8％（P＜0.05）、18.0％（P＜0.01）、14.5％（P＜0.05）和8.9％（P＜0.05），葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶的活性呈下降趋势（P＞0.05）。而且，甜菜碱使肥育猪皮下脂肪FAS mRNA表达降低了25.0％（P＜0.05），FAS活性和FAS mRNA表达量之间具有较好的相关性（相关系数为0.93，P＜0.01）。另外，甜菜碱使肥育猪皮下脂肪cAMP含量提高了23.4％（P＜0.05）。生长激素脉冲分泌特点分析表明：添加甜菜碱（1250 mg／kg）显着提高肥育猪GH分泌的基础水平、总体水平和峰强度，分别比对照组提高了41.8％（P＜0.01）、49.0％（P＜0.01）和35.1％（P＜0.05）。甜菜碱对肥育猪GH分泌频率和峰持续时间未产生显着影响（P＞0.05）。血清指标分析显示，添加甜菜碱（1250 mg／kg）明显提高了肥育猪血清胰岛素样生长因子-Ⅰ、胰岛素、游离三碘甲腺原氨酸、游离四碘甲腺原氨酸和促甲状腺激素的水平，分别比对照组提高了55.5％（P＜0.01）、42.3％（P＜0.05）、58.0％（P＜0.01）、51.8％（P＜0.01）和49.7％（P＜0.01）。甜菜碱使肥育猪血清总蛋白、游离脂肪酸含量和脂肪酶活性分别提高了8.8％（P＜0.05）、25.7％（P＜0.01）和22.6％（P＜0.01），血清尿素氮含量降低了21.6％（P＜0.01），但对血清其它生化指标无显着影响（P＞0.05）。细胞培养试验结果显示：2 mmol／L、4 mmol／L甜菜碱对培养48 h、96 h的猪原代肝细胞线粒体CPTⅠ活性无显着影响（P＞0.05），1 mmol／L肉碱、肉碱+甜菜碱显着提高了CPTⅠ活性（P＜0.01）；与1 mmol／L肉碱处理组相比，肉碱+甜菜碱对CPTⅠ活性的影响不明显（P＞0.05）；经甜菜碱、肉碱处理的CPTⅠ活性在96 h时比48 h时高（P＜0.05）。本研究结果提示：甜菜碱可显着提高肥育猪胴体瘦肉率和眼肌面积，降低胴体脂肪率和背膘厚，并可促进肥育猪的生长；甜菜碱可显着提高猪血清GH水平，影响GH脉冲分泌幅度；甜菜碱似通过影响猪体内GH、胰岛素样生长因子-Ⅰ、游离三碘甲腺原氨酸、游离四碘甲腺原氨酸、促甲状腺激素及胰岛素水平，降低皮下脂肪组织脂肪生成酶的活性和基因表达（如FAS mRNA表达），提高皮下脂肪组织激素敏感脂酶活性和血清脂肪酶、游离脂肪酸水平，调节肥育猪脂肪的合成与分解代谢，并通过提供肉碱合成所必需的甲基来提高肝脏游离肉碱和肌肉组织酸不溶肉碱的含量，降低肌肉线粒体CPTⅠ活性和CPTⅠmRNA表达，在减少体脂沉积（主要是皮下脂肪）同时，适度增加肌肉脂肪含量，从而发挥降低和重新分配体脂的作用。
廖波[5]（2003）在《猪肝细胞的分离培养和AMPK活性调控的研究》文中指出本试验在简化细胞培养方法的基础上，研究激活剂5-氨基-4-咪唑羧基酰氨核苷（AICAR）和抑制剂8-溴-腺甘一磷酸（Br8-AMP）对猪肝细胞AMPK活性的影响。猪肝细胞的分离采用二步胶原酶灌注法，细胞进行悬浮培养，简化之处是在培养过程不充氧气（95∶5）；AMPK活性研究采用单因素设计，设三个处理，分别为对照组、激活组和抑制组，在激活组和抑制组的培养液分别加入AICAR和Br8-AMP，浓度均为0.2mmol／1。测定30min、60min、180min细胞培养液中的谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、尿素（BU）和细胞AMPK的活性。结果表明： 本试验采用的猪肝细胞分离方法，能分离得到较多的猪肝细胞，并保证细胞有较好的结构功能完整性，简化的培养操作能在180min内维持细胞较高的活性，可用于AMPK的研究； 在猪肝细胞培养液中分别加入0.2mmol／1的AICAR和Br8-AMP对仔猪肝细胞AMPK的活性有着不同程度的影响。猪肝细胞培养30min、60min，AICAR使仔猪肝细胞AMPK活性升高分别为8.11％、46.20％；Br8-AMP使AMPK的活性降低分别为9.13％、22.39％。 本试验表明：在体外研究中激活剂AICAR和抑制剂Br8-AMP可以有效的调节猪肝细胞AMPK的活性。
张颖,白雪帆,黄长形,吴军正[6]（2002）在《肝细胞体外培养技术的研究现状》文中研究说明本文综述了肝细胞原代分离、低温冻存、培养液补充物、常用肝细胞培养方法等肝细胞体外培养的有关内容,强调非实质细胞和基质生物学在维持细胞形态和功能方面的重要性。体外肝细胞培养技术及其应用方式都取得了长足进步,反映了肝组织生物学的重大进展。许多新技术已应用于临床,取得良效,如微囊肝技术用于肝细胞移植 肝细胞中空毛细血管三维培养技术用于生物型人工肝支持系统等。随着肝细胞生物学和细胞培养技术以及细胞工程技术的发展,我们将能更好地模拟肝细胞的体内生长环境,从而体外大规模长期培养活力旺盛 功能良好的肝细胞,应用于临床。
陈耀凯,王宇明[7]（2002）在《生物人工肝研究的若干新进展》文中进行了进一步梳理生物人工肝的研究在近年取得了较大进展。聚氨酯泡沫（PUF）等新型材料用于肝细胞培养、肝细胞与骨髓细胞共同培养以及肝细胞生长因子的应用对肝细胞的生长与代谢是有益的;培养液中添加激素与氨基酸有助于恢复受血浆损伤肝细胞的功能;甘氨酸及ZVAD-fmk等细胞保护剂有益于维持生物人工肝的代谢功能;甲磺酸萘莫司他（NM）可预防FHF血浆对肝细胞的损伤作用,保持猪肝细胞在FHF患者血浆中的活性,使猪肝细胞生物人工肝性能进一步增强;纤维膜孔隙、膜组成成分及暴露时间是影响猪内生逆转录病毒（PERV）跨膜传播的主要因素;生物人工肝的疗效得到进一步验证;一些学者对物理型人工肝或/和中间型人工肝与生物人工肝组成的混合型生物人工肝进行了新的尝试。
王宇明,陈耀凯[8]（2001）在《生物人工肝研究的若干新进展》文中提出生物人工肝（bioartificial liver,BAL）是当前体外人工肝支持系统研究领域的主流,由于其在动物实验及临床应用中均显示了较好的应用前景,因而成为该领域的研究重点.随着相关研究的不断深入,BAL研究的进展非常迅速,本文将近两、三年来国外有关BAL的重要研究进展作一简要综述.1 肝细胞培养目前常用的肝细胞培养方法主要是球形体聚集培养和微载体培养,但近来应用新材料、新方法进行肝细胞培养获得了不少新的发现.Fujii等在用聚氨酯泡沫（polyurethane foam,PUF）培养大鼠肝细胞时
二、生物人工肝研究的若干新进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、生物人工肝研究的若干新进展（论文提纲范文）
（1）LC-MS/MS法测定甲磺酸萘莫司他有关物质（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 试药与仪器 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 设备 |
| 2 LC-MS/MS条件及检测结果 |
| 2.1 色谱条件色谱柱 |
| 2.2 质谱条件 |
| 2.3 供试液制备 |
| 2.4 采用LC-MS/MS联用获得1的一级、二级质谱图 |
| 3 有关物质的测定 |
| 3.1 色谱条件 |
| 3.2 质谱条件 |
| 3.3 定性判定 |
| 3.4 对照品溶液配制 |
| 3.5 供试液制备 |
| 3.6 标准曲线 |
| 3.7 精密度试验 |
| 3.8 重复性试验 |
| 3.9 加标回收率试验 |
| 3.10 有关物质的含量测定 |
| 4 讨论 |
（2）大鼠原代肝细胞体外三维培养研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词英汉对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 第二章 大鼠原代肝细胞体外三维培养研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要试剂及配置 |
| 1.2 仪器、设备和材料 |
| 1.2.1 主要仪器设备 |
| 1.2.2 其它器材 |
| 1.3 试验动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 三维胶原蛋白支架形态表征 |
| 2.2 肝细胞与骨髓间充质干细胞的获取 |
| 2.3 肝细胞的2D培养 |
| 2.4 肝细胞的3D培养 |
| 2.5 肝细胞的染色鉴定 |
| 2.6 肝细胞活力分析 |
| 2.7 肝细胞的功能检测 |
| 2.7.1 白蛋白分泌测定 |
| 2.7.2 尿素合成测定 |
| 2.7.3 EROD酶活力测定 |
| 2.7.4 P450酶活力测定 |
| 2.8 肝细胞基因表达分析 |
| 2.8.1 待分析基因及引物设计 |
| 2.8.2 RT-PCR |
| 2.8.3 目的基因分析 |
| 2.9 数据采集及分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 三维胶原蛋白支架形态表征 |
| 3.2 肝细胞的培养 |
| 3.3 肝细胞的活力分析 |
| 3.4 肝细胞功能分析 |
| 3.5 肝细胞基因表达分析 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（3）仿生学研究现状及其在纺织上的应用（论文提纲范文）
| 1 仿生学研究方法 |
| 2 仿生学的相似原理 |
| 3仿生技术分类[3] |
| 3.1 结构仿生 |
| 3.2 功能仿生 |
| 3.3 材料仿生 |
| 3.4 力学仿生 |
| 3.5 控制仿生 |
| 4 仿生学在纺织上的应用 |
| 4.1 仿生纤维 |
| 4.1.1 多层扁平纤维 |
| 4.1.2 超微坑纤维 |
| 4.1.3 中空纤维 |
| 4.1.4 会呼吸的纤维 |
| 4.1.5 仿蜘蛛丝 |
| 4.1.6 变色纤维 |
| 4.1.7 仿生抗菌纤维 |
| 4.1.8 人造纤维 |
| 4.1.9 异形纤维 |
| 4.2 仿生织物 |
| 4.2.1 防水拒油织物 |
| 4.2.2 非织造布 |
| 4.2.3 仿真织物 |
| 4.2.4 KEG保温面料 |
| 4.2.5 仿生智能织物 |
| 4.2.6 仿生纳米纺织品 |
| 4.3 仿生染色 |
| 4.4 仿生服饰 |
| 4.4.1 防护 |
| 4.4.1.1 防弹服 |
| 4.4.1.2 运动防护装 |
| 4.4.1.3 其他 |
| 4.4.2 隐蔽 |
| 4.4.3 抗荷 |
| 4.4.4 提醒、警告 |
| 4.4.5 医疗保健 |
| 4.4.6 审美情趣 |
| 5 结语 |
（4）甜菜碱对肥育猪脂肪代谢及其关键酶基因表达的影响与机理研究（论文提纲范文）
| 主要英文缩略词 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 猪脂肪代谢及其调控研究进展 |
| 1.1 脂肪组织发育规律 |
| 1.2 脂肪的合成与分解及其转运 |
| 1.2.1 脂肪的合成 |
| 1.2.2 脂肪的分解、氧化及其转运 |
| 1.3 脂肪代谢的调控 |
| 1.3.1 遗传选育 |
| 1.3.2 激素对脂肪代谢的调控 |
| 1.3.3 营养调控 |
| 1.3.4 免疫调控 |
| 第二章 甜菜碱在养猪生产中的应用研究进展 |
| 2.1 甜菜碱的理化性质 |
| 2.2 甜菜碱在动物体内的代谢 |
| 2.3 甜菜碱的功能 |
| 2.3.1 甜菜碱的转甲基作用 |
| 2.3.2 甜菜碱调节渗透压的作用 |
| 2.3.3 甜菜碱的诱食作用 |
| 2.3.4 甜菜碱的抗应激作用 |
| 2.3.5 甜菜碱对维生素的稳定作用 |
| 2.4 甜菜碱在养猪生产中的应用 |
| 2.4.1 甜菜碱对猪生长性能的影响 |
| 2.4.2 甜菜碱对猪胴体组成的影响 |
| 2.4.3 甜菜碱对肉质的影响 |
| 2.4.4 甜菜碱对(早期)断奶仔猪腹泻的影响 |
| 2.4.5 甜菜碱对(妊娠)母猪繁殖性能的影响 |
| 2.5 甜菜碱的作用机理 |
| 2.5.1 甜菜碱与蛋白质、氨基酸代谢 |
| 2.5.2 甜菜碱与脂肪代谢 |
| 2.5.3 甜菜碱对生长调控轴激素的影响 |
| 2.5.4 甜菜碱与猪肉品质 |
| 2.5.5 甜菜碱与营养物质消化吸收 |
| 第三章 本研究的目的、意义及主要内容 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第四章 FAS、L-CPT I、M-CPT I 和 β-actin 基因片断的克隆 |
| 4.1 基因克隆策略 |
| 4.2 试验材料 |
| 4.2.1 动物材料 |
| 4.2.2 菌种与载体 |
| 4.2.3 仪器设备和试剂 |
| 4.2.4 引物 |
| 4.2.5 培养基及主要试剂的配制 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 总 RNA 的提取 |
| 4.3.2 RNA 含量的测定 |
| 4.3.3 反转录 |
| 4.3.4 PCR 反应 |
| 4.3.5 PCR 产物电泳，检测目的条带是否与设计大小相符 |
| 4.3.6 PCR 产物的割胶回收 |
| 4.3.7 割胶回收的 PCR 产物与 pUCm-T Vector 连接 |
| 4.3.8 感受态细胞的制备与目的 DNA 的热激转化 |
| 4.3.9 重组克隆的筛选、重组质粒的提取与鉴定 |
| 4.3.10 重组 DNA 核苷酸序列测定分析 |
| 4.4 试验结果 |
| 4.4.1 FAS、L-CPT I、M-CPT I 和 β-actin 基因 RT-PCR 产物电泳结果 |
| 4.4.2 PCR 产物克隆及重组质粒鉴定 |
| 4.4.3 重组质粒测序结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 半定量 RT-PCR 法测定 FAS、L-CPT I 和 M-CPT I mRNA 丰度的条件优化 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 动物材料 |
| 5.1.2 仪器设备和试剂 |
| 5.1.3 主要试剂的配制 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 总 RNA 的提取 |
| 5.2.2 RNA 含量的测定 |
| 5.2.3 反转录 |
| 5.2.4 PCR 反应 |
| 5.2.5 琼脂糖凝胶电泳 |
| 5.3 试验结果 |
| 5.3.1 Mg~(2+) 浓度对 FAS、L-CPT I、M-CPT I 和 β-actin 基因扩增效率的影响 |
| 5.3.2 循环数对 FAS、L-CPT I、M-CPT I 和 β-actin 基因扩增效率的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 饲养试验和屠宰试验 |
| 6.1 试验材料 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 饲养试验 |
| 6.2.2 动态采血 |
| 6.2.3 屠宰试验 |
| 6.2.4 样品收集与保存 |
| 6.2.5 肝脏和背最长肌粗蛋白、粗脂肪含量的测定 |
| 6.2.6 肝脏和背最长肌游离肉碱、酸不溶肉碱含量的测定 |
| 6.2.7 肝脏和背最长肌线粒体 CPT I 活性的测定 |
| 6.2.8 肝脏和背最长肌线粒体 CPT I mRNA 丰度的测定 |
| 6.2.9 皮下脂肪激素敏感脂酶活性的测定 |
| 6.2.10 皮下脂肪脂蛋白脂酶活性的测定 |
| 6.2.11 皮下脂肪 NADPH 生成酶活性的测定 |
| 6.2.12 皮下脂肪乙酰-CoA 羧化酶活性的测定 |
| 6.2.13 皮下脂肪 FAS 活性的测定 |
| 6.2.14 皮下脂肪 FAS mRNA 丰度的测定 |
| 6.2.15 血清生化指标的测定 |
| 6.2.16 血清激素水平的测定 |
| 6.2.17 皮下脂肪 cAMP 含量的测定 |
| 6.2.18 统计分析 |
| 6.3 试验结果 |
| 6.3.1 生长性能 |
| 6.3.2 胴体组成 |
| 6.3.3 内脏器官相对重量 |
| 6.3.4 肝脏和背最长肌粗蛋白、粗脂肪含量 |
| 6.3.5 肝脏和背最长肌游离肉碱、酸不溶肉碱含量及其比值 |
| 6.3.6 肝脏和背最长肌线粒体 CPT I 活性 |
| 6.3.7 肝脏和背最长肌线粒体 CPT I mRNA 丰度 |
| 6.3.8 血清甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸含量及脂肪酶活性 |
| 6.3.9 皮下脂肪激素敏感脂酶和脂蛋白脂酶活性 |
| 6.3.10 皮下脂肪组织脂肪生成酶活性 |
| 6.3.11 皮下脂肪 FAS mRNA 丰度 |
| 6.3.12 生长激素脉冲分泌模式及其特征 |
| 6.3.13 血清激素水平 |
| 6.3.14 皮下脂肪 cAMP 含量 |
| 6.3.15 血清其它生化指标 |
| 6.4 讨论 |
| 6.4.1 甜菜碱对肥育猪生长性能的影响 |
| 6.4.2 甜菜碱对肥育猪胴体组成和内脏器官的影响 |
| 6.4.3 甜菜碱对肥育猪蛋白质代谢的影响 |
| 6.4.4 甜菜碱对肥育猪脂肪代谢的影响及其调控机理 |
| 6.4.5 甜菜碱对肥育猪生长激素脉冲分泌模式的影响 |
| 6.4.6 甜菜碱对肥育猪 IGF-I 分泌的影响 |
| 6.4.7 甜菜碱对肥育猪 TSH、FT_3、FT_4 和胰岛素分泌的影响 |
| 6.4.8 其它 |
| 第七章 细胞培养试验 |
| 7.1 试验材料 |
| 7.1.1 仪器设备和试剂 |
| 7.1.2 试剂的配制 |
| 7.2 试验方法 |
| 7.2.1 试验取材 |
| 7.2.2 猪原代肝细胞的分离获取 |
| 7.2.3 试验分组 |
| 7.2.4 取样及指标测定 |
| 7.2.5 统计分析 |
| 7.3 试验结果 |
| 7.3.1 生化指标 |
| 7.3.2 CPT I 活性 |
| 7.4 讨论 |
| 7.4.1 肝细胞的分离方法 |
| 7.4.2 原代培养肝细胞的活性分析 |
| 7.4.3 甜菜碱对原代培养猪肝细胞线粒体 CPT I活性的影响 |
| 第三篇 提示及创新点 |
| 提示 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻博期间发表的与学位论文相关的文章 |
| 致谢 |
（5）猪肝细胞的分离培养和AMPK活性调控的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 AMPK的发现 |
| 1.2 AMPK的生化特征 |
| 1.2.1 分子结构 |
| 1.2.2 AMPK结构和活性的关系 |
| 1.2.2.1 磷酸化和去磷酸化对AMPK活性的调节作用 |
| 1.2.2.2 别构作用(R和T构象变化)对AMPK活性的调节作用 |
| 1.3 AMPK的主要作用底物 |
| 1.3.1 β-羟基-β-甲基-戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR) |
| 1.3.2 乙酰辅酶A羧化酶(ACC) |
| 1.3.3 激素敏感脂酶(HSL) |
| 1.3.4 糖原合成酶(GS) |
| 1.3.5 肌酸激酶(CK) |
| 1.3.6 sn-甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT) |
| 1.4 AMPK对养分代谢的调节作用 |
| 1.4.1 对脂类代谢的调控作用 |
| 1.4.1.1 抑制脂质合成 |
| 1.4.1.1.1 抑制脂肪酸的合成 |
| 1.4.1.1.2 抑制甘油三酯的合成 |
| 1.4.1.1.3 抑制固醇的合成 |
| 1.4.1.2 促进脂肪酸氧化 |
| 1.4.2 调控碳水化合物代谢 |
| 1.4.2.1 促进肌细胞的葡萄糖摄入 |
| 1.4.2.2 抑制糖原合成 |
| 1.4.2.3 抑制糖异生 |
| 1.5 研究AMPK的方法 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.2 研究手段 |
| 1.5.2.1 活体研究 |
| 1.5.2.2 组织培养 |
| 1.5.3 AMPK活性的调控 |
| 1.5.3.1 激活剂(AICAR) |
| 1.5.3.2 抑制剂(Br~8-AMP) |
| 1.5.3.3 分子生物学技术调节AMPK |
| 1.5.3.4 调节AMPK活性的其他方式 |
| 1.5.4 AMPK酶活测定方法 |
| 2 存在的问题和本研究的目的意义 |
| 2.1 存在的问题 |
| 2.2 目的和意义 |
| 3 材料和方法 |
| 3.1 技术路线 |
| 3.2 试验设计 |
| 3.3 试剂和仪器 |
| 3.3.1 试剂 |
| 3.3.1.1 肝细胞分离培养的主要试剂 |
| 3.3.1.2 用于AMPK分离测定的试剂 |
| 3.3.2 仪器 |
| 3.4 试验过程 |
| 3.4.1 肝细胞分离步骤 |
| 3.4.1.1 前期准备 |
| 3.4.1.2 肝细胞分离操作 |
| 3.4.2 细胞培养 |
| 3.4.3 培养细胞的处理 |
| 3.5 AMPK酶活测定样品制备 |
| 3.6 测定指标和方法 |
| 3.6.1 AMPK活性 |
| 3.6.2 AMPK样品上清液蛋白含量的测定 |
| 3.6.3 细胞培养液生化指标 |
| 3.7 数据处理分析 |
| 4 试验结果与分析 |
| 4.1 分离培养细胞的形态观察 |
| 4.2 培养液生化指标 |
| 4.3 AMPK的活性 |
| 5 讨论 |
| 5.1 猪肝细胞分离培养操作的评价 |
| 5.1.1 猪肝细胞分离方法 |
| 5.1.2 肝细胞培养培养方法 |
| 5.1.3 本试验猪肝细胞分离培养液分析 |
| 5.2 激活剂和抑制剂对猪肝细胞AMPK活性的影响 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
（6）肝细胞体外培养技术的研究现状（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 肝细胞原代分离和储存 |
| 1.1 肝细胞原代分离 |
| 1.2 肝细胞的储存方法 |
| 2 肝细胞培养液中的关键补充物 |
| 2.1 二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO) |
| 2.2 尼克酰胺(Nicotinamide) |
| 2.3 抗坏血酸(L-ascorbic acid 2-phosphate,Asc-2P) |
| 2.4 生长因子(Growth Factor,GF) |
| 3 肝细胞培养方式 |
| 3.1 肝细胞与非实质细胞(Nonparenchymal Cells,NPCs)共同培养 |
| 3.2 肝细胞单层培养 |
| 3.3 肝细胞微载体和球形聚集体法培养 |
| 3.4 肝细胞微囊包裹培养 |
| 3.5 肝细胞中空纤维管培养 |
（7）生物人工肝研究的若干新进展（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 肝细胞培养和肝细胞保护 |
| 1.1 肝细胞培养 |
| 1.2 肝细胞保护 |
| 2 疗效和安全性 |
| 2.1 疗效 |
| 2.2 安全性 |
| 3 新的尝试 |
四、生物人工肝研究的若干新进展（论文参考文献）
- [1]LC-MS/MS法测定甲磺酸萘莫司他有关物质[J]. 赵煜松,曾海霞,孙卓. 智慧健康, 2021(01)
- [2]大鼠原代肝细胞体外三维培养研究[D]. 张少飞. 甘肃农业大学, 2018(11)
- [3]仿生学研究现状及其在纺织上的应用[J]. 赵雪,展义臻,何瑾馨. 纺织科技进展, 2008(05)
- [4]甜菜碱对肥育猪脂肪代谢及其关键酶基因表达的影响与机理研究[D]. 黄其春. 浙江大学, 2006(01)
- [5]猪肝细胞的分离培养和AMPK活性调控的研究[D]. 廖波. 四川农业大学, 2003(03)
- [6]肝细胞体外培养技术的研究现状[J]. 张颖,白雪帆,黄长形,吴军正. 世界华人消化杂志, 2002(03)
- [7]生物人工肝研究的若干新进展[J]. 陈耀凯,王宇明. 世界华人消化杂志, 2002(01)
- [8]生物人工肝研究的若干新进展[A]. 王宇明,陈耀凯. 中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编, 2001