一、bcl-2、baX在胎儿宫内发育迟缓患者胎盘中的表达（论文文献综述）
马丽娟[1]（2020）在《转录因子TWIST1在子痫前期发病中的作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景妊娠期高血压疾病是全世界范围内严重威胁母婴健康的妊娠期并发症,发病率为5%-12%。子痫前期（Preeclampsia,PE）在妊娠20周后发病,临床症状严重的子痫前期为重度子痫前期,妊娠34周之前发病的重度子痫前期称为早发性重度子痫前期（Early Onset Severe Preeclampsia,EOSP）。患者发病越早、病情越重,母儿预后越差。子痫前期的基本病理生理改变表现为患者全身小血管痉挛、血管内皮损伤和器官血液灌流量减少,多脏器出现缺血缺氧性损害,同时胎盘灌注不足可导致胎儿损伤。目前认为,胎盘浅着床是子痫前期发病的基础,导致胎盘长期缺血、氧化应激,释放异常胎盘因子进入母体血液循环,诱发子痫前期。有研究证实,EOSP是与胎盘发育缺陷关系最为密切的子痫前期类型。胎盘滋养细胞是胎盘向子宫内膜和肌层浸润的执行者,因此探索调控滋养细胞活性和功能的因素及其干预手段,是阐明子痫前期发病机制及指导其防治的关键点。TWIST1在多种人体组织和肿瘤中有调节细胞分化、抑制凋亡和增强侵袭等作用。TWIST1在胎盘滋养细胞中广泛表达,并且其表达量呈现孕周依赖性增加。文献报道TWIST1有促进滋养细胞分化和侵袭的能力,因此我们推测其可能在妊娠期胎盘相关性疾病--子痫前期的发病中有重要的作用,但两者之间的相关性需要进一步证实。此外,TWIST1是否对介导滋养细胞的凋亡发挥作用也尚未明确。低分子肝素（Low Molecular Weight Heparin,LMWH）和阿司匹林（Aspirin）是目前临床上公认有效的降低子痫前期发病风险的药物,有研究表明LMWHH和Aspirin可以直接调节滋养细胞的活性和功能,但作用机制未明。第一部分EOSP患者与体外缺氧模型中滋养细胞凋亡率及TWIST1表达背景及目的:在妊娠早期,胎盘滋养细胞处于生理性缺氧状态,随后滋养细胞逐渐浸润至子宫内膜直至肌层的内1/3,并进入子宫螺旋小动脉管腔取代血管内皮,导致管腔增大、弹性增加。胎盘的绒毛面积逐渐扩大,子宫-胎盘的血流供应阻力降低、血容量增加,胎盘滋养细胞的缺氧状态得到纠正。胎盘滋养细胞凋亡率增加和侵袭能力下降会引起胎盘浸润不足和子宫血管重铸障碍,导致胎盘供血不足和滋养细胞氧化应激,最终导致子痫前期的发生。TWIST1促进滋养细胞分化和侵袭的作用已被证实,但其在子痫前期患者滋养细胞中的表达情况未见报道。在第一部分中,首先对EOSP患者和匹配孕周非高血压孕妇分娩的新生儿重量、评分以及胎盘重量进行比较,并检测两组间胎盘TWISTI的表达和滋养细胞凋亡率的差异,然后在体外模拟妊娠早期和子痫前期患者胎盘滋养细胞的缺氧状态,检测TWIST1表达和细胞凋亡率的变化。方法:1.采用回顾性研究,对2016.12-2018.10年间分娩的27例EOSP患者与31例孕周相匹配的非高血压孕妇分娩的新生儿体重、Apgar评分和胎盘重量的差异进行统计分析。2.利用Western blot、PCR和免疫组化检测EOSP患者和孕周相匹配的非高血压孕妇胎盘中TWIST1的表达;利用Tunel染色和Western blot检测两组间胎盘滋养细胞的凋亡情况。3.在体外缺氧模型中,利用Western blot检测滋养细胞TWIST1的表达;利用Hoechst 33258染色和Annexin V检测细胞增殖和凋亡的情况。结果:1.与同孕期分娩的非高血压孕妇相比,EOSP患者分娩的新生儿体重、Apgar评分及胎盘重量明显降低。2.与同孕期分娩的非高血压孕妇相比,EOSP患者胎盘中TWIST1表达降低,滋养细胞凋亡率增加;3.缺氧可导致体外培养的滋养细胞TWIST1表达降低、细胞凋亡率升高,而且呈现时间依赖性。结论:EOSP患者的新生儿不良结局发生率高;胎盘滋养细胞TWIST1表达降低与细胞凋亡率升高及EOSP发病具有正相关性。第二部分TWIST1在缺氧滋养细胞中的作用背景及目的:在女性生殖功能中,TWIST1有调节子宫基质细胞蜕膜化、胚胎发育和器官分化的作用。胎盘的发育和肿瘤的生长在诸多方面有极其相似的特点,因此可以推测TWIST1对肿瘤细胞凋亡的调控机制也作用于滋养细胞中。在本章中,着眼于缺氧引起的滋养细胞活性和功能的改变,通过调节TWIST1的表达,检测缺氧滋养细胞增殖、凋亡、侵袭、血管生成能力等方面的变化,从而深入探讨TWIST1在胎盘发育和子痫前期发病机制中的作用。方法:1.通过转染过表达TWIST1的质粒获得过表达TWIST1的细胞株,借助慢病毒载体获得干扰TWIST1表达的稳定细胞株,并对上述细胞株进行缺氧培养。2.利用 Edu 染色、Hochst33342 染色、Annexin V 和 Western blot 检测缺氧模型中TWIST1过//低表达对滋养细胞增殖、凋亡、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9）和侵袭相关蛋白（MMP-2、MMP-9）表达的作用。3.利用平板克隆、Transwell、血管形成实验检测缺氧模型中TWIST1过/低表达对滋养细胞克隆形成能力、细胞迁移和侵袭以及血管生成能力的作用。4.利用流式细胞术检测缺氧模型中TWIST1过/低表达对滋养细胞ROS和线粒体膜电位的作用。结果:1.过表达TWIST1抑制缺氧引起滋养细胞的凋亡,促进细胞增殖,凋亡相关蛋白也发生相应变化;而低表达TWIST1则促进细胞的凋亡、抑制细胞的增殖。2.过表达TWIST1可以逆转缺氧导致的滋养细胞克隆形成、血管生成能力、细胞迁移和侵袭能力的降低,伴随着侵袭相关蛋白表达的升高;而低表达TWIST1则进一步加剧缺氧导致的滋养细胞侵袭能力的降低。3.过表达TWIST1降低缺氧滋养细胞的活性氧簇（Reactive Oxygen Species,ROS）水平,提高细胞线粒体膜电位;而低表达TWIST1进一步加剧缺氧导致的滋养细胞ROS增加和线粒体膜电位下降。结论:TWIST1参与缺氧状态下滋养细胞的增殖、凋亡、血管形成、细胞迁移能力的调节,抑制细胞凋亡,促进细胞侵袭。第三部分 凋亡激活剂/抑制剂对TWIST1调节缺氧滋养细胞凋亡的影响背景及目的:细胞凋亡是基因控制的细胞自主有序的死亡,目前已确定的是线粒体途径、死亡受体途径和内质网途径三条通路,其中线粒体途径是哺乳动物中最重要的凋亡通路。线粒体途径激活后,线粒体膜电位和凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比降低,进而启动Caspase家族级联反应,导致凋亡。Caspase-9是线粒体凋亡途径中承上启下的关键因子,而Caspase-3是三条凋亡通路的共同底物,是细胞凋亡的执行者。我们之前的研究证实,TWIST1可以调节缺氧滋养细胞的凋亡,同时伴随着线粒体途径中凋亡相关蛋白和线粒体膜电位的变化,提示TWIST1可能影响滋养细胞的线粒体凋亡途径。在本章中,通过在缺氧滋养细胞模型中分别加入Caspase-3的激活剂以及Caspase-9的激活剂/抑制剂,进一步探讨TWIST1调节滋养细胞凋亡的作用机制。方法:1.在缺氧滋养细胞模型中过表达TWIST1,并加入Caspase-3的激活剂（PAC-1）、Caspase-9 的激活剂（YC137）或抑制剂（Z-LEHD-FMK）,利用 Hoechst染色和Annexin V检测细胞凋亡的情况。2.利用Western blot检测加入Caspase-3的激活剂、Caspase-9的激活剂或抑制剂后的缺氧滋养细胞中线粒体凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9）和侵袭相关蛋白（MMP-2、MMP-9）的表达。结果:1.过表达TWIST1抑制了缺氧导致的滋养细胞凋亡,加入Caspase-3和Caspase-9激活剂均可逆转TWIST1对细胞凋亡的保护性作用,而加入Caspase-9抑制剂则增强了 TWIST1抑制凋亡的作用。2.过表达TWIST1抑制了缺氧对滋养细胞凋亡相关蛋白和侵袭相关蛋白表达的影响,加入Caspase-3和Caspase-9激活剂后逆转了其作用效果,而加入Caspase-9抑制剂后增强了其作用效果。结论:TWIST1通过介导线粒体凋亡途径发挥调节缺氧滋养细胞凋亡的作用。第四部分TWIST1调节Aspirin和LMWH影响滋养细胞活性和功能的机制背景及目的:Aspirin和LMWH降低子痫前期发病风险的作用已得到公认。研究证实,除通过发挥抗凝作用改善胎盘循环外,Aspirin和LMWH也可直接作用于胎盘滋养细胞,调节其活性和功能,但其作用机制尚未完全明确。在本章中,在缺氧培养的滋养细胞中加入Aspirin和LMWH,探讨药物对滋养细胞凋亡和侵袭功能的影响;此外,通过干扰TWIST1的表达进一步探讨Aspirin和LMWH对滋养细胞发挥作用的机制。方法:1.用不同剂量Aspirin和LMWH处理缺氧滋养细胞,利用Annexin V检测细胞凋亡率的变化,选择对细胞凋亡影响最明显且浓度最低的药物剂量。2.利用Edu染色、transwell检测Aspirin和LMWH对缺氧滋养细胞增殖和侵袭能力的影响;利用Real-time PCR、Western blot和免疫荧光检测Aspirin和LMWH对缺氧滋养细胞TWIST1表达、凋亡相关蛋白表达和侵袭相关蛋白表达的影响;利用流式细胞术检测Aspirin和LMWH对缺氧滋养细胞ROS和线粒体膜电位的影响。3.在缺氧滋养细胞模型中低表达TWIST1,利用Edu染色、Annexin V、Transwell和Western blot检测Aspirin和LMWH对滋养细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响;利用流式细胞术检测干扰TWIST1表达后Aspirin和LMWH对缺氧滋养细胞ROS和线粒体膜电位的影响。结果:1.Aspirin和LMWH降低缺氧滋养细胞的凋亡率,增加其增殖和侵袭能力;Aspirin和LMWH逆转缺氧导致的TWIST1表达、凋亡和侵袭相关蛋白变化;Aspirin和LMWH逆转缺氧引起的滋养细胞ROS升高和线粒体膜电位下降。2.低表达TWIST1逆转Aspirin和LMWH对缺氧滋养细胞增殖、迁移和凋亡的保护性作用,削弱Aspirin和LMWH对缺氧滋养细胞ROS和线粒体膜电位的影响。结论:Aspirin和LMWH可以通过促进TWIST1的表达抑制缺氧滋养细胞的凋亡,促进细胞侵袭,在胎盘发育和子宫血管重铸过程中发挥保护性作用。这一机制的明确为Aspirin和LMWH用于子痫前期的早期预防提供了理论依据。小结在本论文中,首先通过比较EOSP患者与非高血压孕妇分娩的新生儿结局和胎盘重量的差异,以及两组孕妇胎盘TWIST1表达及细胞凋亡率的差异,发现EOSP患者胎儿预后不良,胎盘滋养细胞TWIST1表达降低和细胞凋亡率增加。然后,模拟妊娠早期及子痫前期患者滋养细胞的缺氧状态,建立细胞模型,研究TWIST1对滋养细胞凋亡和侵袭浸润功能的影响,并深入探讨其调节滋养细胞凋亡的机制,发现TWIST1可以通过介导线粒体凋亡途径降低缺氧导致的细胞凋亡,并促进细胞侵袭。最后,在缺氧培养的滋养细胞中加入Aspirin和LMWH,检测细胞活性和功能的变化,并通过干扰TWIST1的表达探讨药物的作用机制,发现Aspirin和LMWH可以通过促进TWIST1的表达降低滋养细胞的凋亡,增强其侵袭能力。
高山[2]（2020）在《妊娠母猪补饲外源精胺对胎儿及其主要附属物发育的影响》文中指出胎盘和脐带是母胎之间进行物质交换的重要器官,研究胎盘脐带的发育对改善母猪繁殖性能具有重要价值。精胺是一种内源性的碱性多胺,它具有调控基因表达和细胞增殖、分化与凋亡的功能。本试验研究给怀孕母猪饲喂含不同剂量外源精胺的日粮对胎盘、脐带和胎儿发育的影响。将12头胎次和与配公猪相同,膘情、体重和妊娠时间相近的长大母猪随机分为4组,每组3头。其中一组为对照组,饲喂基础日粮;另外三组为处理组,分别饲喂添加4 mg/kg,6 mg/kg和8 mg/kg外源精胺的基础日粮。试验期为30天,从妊娠后第30天开始饲喂至第60天结束。在第60天屠宰母猪,测定胎盘、脐带、胎儿表型数据,收集胎盘组织用于免疫组化和基因蛋白表达的测定。试验结果如下:（1）与对照组相比,4 mg/kg外源精胺显着降低了胎盘面积（P<0.05）;6 mg/kg外源精胺显着增加了胎盘重量（P<0.05）;4 mg/kg,6 mg/kg和8 mg/kg外源精胺显着提升了胎儿体重（P<0.05）。（2）与对照组相比,4 mg/kg,6 mg/kg和8 mg/kg外源精胺显着增加了脐带长度和脐带外直径（P<0.05）;4 mg/kg,6 mg/kg和8 mg/kg外源精胺显着增加了脐静脉外直径和脐动脉外直径（P<0.05）。（3）与对照组相比,4 mg/kg和6 mg/kg外源精胺能显着增加胎盘组织微血管密度（P<0.05）。（4）与对照组相比,6mg/kg和8 mg/kg外源精胺显着增加了胎盘生长因子（Pl GF）和血管生成素（ANG）的m RNA表达水平（P<0.05）;4 mg/kg,6 mg/kg和8 mg/kg外源精胺显着增加了血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维生长因子2（FGF2）和Pl GF的蛋白表达水平（P<0.05）;6 mg/kg和8 mg/kg外源精胺显着增加了ANG的蛋白表达水平（P<0.05）;6 mg/kg外源精胺显着降低了促凋亡因子BAX的m RNA表达水平（P<0.05）;8 mg/kg外源精胺显着降低了铜锌超氧化物歧化酶（Cu Zn-SOD）的m RNA表达水平（P<0.05）;4 mg/kg,6 mg/kg和8 mg/kg外源精胺显着增加了葡萄糖转运基因的m RNA表达水平（P<0.05）;添加外源精胺对VEGFA、FGF2、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）和过氧化氢酶（CAT）的m RNA表达水平无显着影响（P>0.05）。综上所述,日粮添加外源精胺可能通过提高妊娠母猪血管发生和血管生成相关基因的表达、减少胎盘组织细胞凋亡和增加胎盘葡萄糖转运功能进而促进胎盘脐带血管和胎儿的生长发育。给妊娠母猪饲喂含6 mg/kg外源精胺的日粮对改善胎盘及脐带的发育具有明显效果。
田梦然[3]（2020）在《葡萄糖酸锌对子痫前期样大鼠炎症反应和凋亡的干预作用》文中指出目的:使用亚硝基-左旋-精氨酸甲酯（L-NAME）建立子痫前期（PE）样大鼠模型,并给予葡萄糖酸锌处理,检测氧化应激、炎症、凋亡相关指标的改变并观察孕鼠出生结局,探讨葡萄糖酸锌对PE模型大鼠的保护作用及其预防PE发生的可能机制。方法:（1）实验分组及处理:将40只Wistar孕鼠随机分为四组,每组10只,即空白对照组（生理盐水灌胃和皮下注射）、药物对照组（葡萄糖酸锌5 mg/kg/d灌胃及生理盐水皮下注射）、PE模型组（生理盐水灌胃及L-NAME 80mg/kg/d皮下注射）和PE治疗组（葡萄糖酸锌灌胃及L-NAME皮下注射）。（2）PE造模指标监测:在妊娠早期（包括给药前）、中期、晚期各2次检测大鼠血压和尿蛋白。（3）出生结局检测:孕期第20天处死动物,收集血液和胎盘,测量胎鼠及胎盘重量、胎鼠身长及尾长等。（4）氧化应激指标测定:检测抗氧化因子（CAT、GSH和SOD）及氧化损伤指标丙二醛（MDA）。（5）炎症因子和凋亡相关因子测定:检测IL-6和TNF-α等炎症因子及Bcl-2和Bax等凋亡相关因子。结果:（1）经L-NAME诱导后PE模型组大鼠的血压与尿蛋白均较对照组明显增高,胎鼠、胎盘重量及身长、尾长显着降低,PE模型构建成功。经葡萄糖酸锌干预后所有指标均得到改善,大部分指标达到对照水平。（2）与对照组比较,PE模型鼠血清抗氧化因子CAT、GSH和SOD水平降低,而脂质过氧化产物MDA升高。经葡萄糖酸锌干预后,抗氧化因子的水平回升,氧化损伤减轻。（3）PE模型血中IL-6和TNF-α的水平升高,Bcl-2/Bax比值下降,经葡萄糖酸锌干预后,炎症因子和凋亡指标出现逆转,接近或达到对照的水平。结论:葡萄糖酸锌可改善PE模型鼠的血压、蛋白尿及妊娠结局等,对PE具有一定的保护作用,其机制可能与拮抗氧化应激,减少机体氧化损伤、炎症反应及抑制线粒体介导的凋亡等有关。
唐诗[4]（2019）在《骨保护素对宫内发育迟缓大鼠胰岛β细胞增殖的影响及机制研究》文中认为研究目的:宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation,IUGR）是指胎儿未能达到其遗传基因影响下的应有大小,是一种病理生理过程。IUGR会增加成年期发生肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病等代谢综合征的风险。其机制目前尚不十分清楚,目前被普遍认同的是“节约表型假说”,其核心内容为胎儿及新生儿早期营养不良会导致胰岛β细胞的发育异常及胰岛功能损伤,这种解剖结构和功能的变化可能导致成年后T2DM的发生。大量的研究发现,大鼠的胰岛β细胞需经过生后2-3周重塑过程才能有完整的功能,在这段时间给大鼠外源性药物刺激可以改变其胰岛β细胞的增殖水平。骨保护素（osteoprotegerin,OPG）最初是由于其在骨代谢中的重要作用而被广泛研究,近几年的研究发现OPG与胰岛β细胞增殖水平有着密切的关系。大量研究表明,PI3K/AKT通路在胰岛β细胞增殖中发挥着重要的作用,此外也有研究证实OPG在很多组织中可以激活PI3K/AKT通路。FoxO1在胰岛β细胞中表达,磷酸化修饰在FoxO1的核浆转移过程中起着重要的调节作用。PI3K/AKT信号通路激活后可促进FoxO1蛋白质磷酸化,促使FoxO1核输出并且阻断了核定位信号防止FoxO1重返核中,进而引起FoxO1转录活性改变。FoxO1转录活性的改变对细胞的增殖、分化、凋亡和及抗氧化应激等均有重要的影响,且其在改变胰岛β细胞增殖及功能中的作用也被学者研究证实。综上所述,本研究拟比较IUGR大鼠胰腺内OPG表达水平与正常大鼠间是否存在差异;进而明确在生后胰岛β细胞重塑期给予IUGR大鼠外源性OPG,是否影响其胰岛β细胞增殖;并探讨OPG影响胰岛β细胞增殖的过程中是否需要PI3K/AKT/FoxO1这一信号通路的参与,明确OPG影响胰岛β细胞增殖的机制。研究方法:采用孕期全程低蛋白饮食法建立IUGR大鼠动物模型,选择胰腺发育的关键时期,即生后1天、1周、3周及12周为时间点,取材后测量各组大鼠体重及胰腺重量。应用快速生化血糖仪测量空腹血糖,ELISA法测定空腹胰岛素,HE染色法观察胰岛形态,Ki67及胰岛素免疫荧光双染法观察胰岛β细胞增殖情况,通过Westen Blot、免疫组化、Real-time PCR方法检测胰腺组织中OPG蛋白和mRNA的表达。再选取正常及IUGR大鼠,随机分为三组,其中一组是IUGR+OPG组,即IUGR大鼠生后24小时内第一次腹腔注射重组人OPG,剂量为3ug/kg,隔日1次,直至用于取材或生后3周;另一组是IUGR组,即IUGR大鼠生后24小时内第一次腹腔注射与重组人OPG溶剂体积相同的注射用水,隔日1次,直至用于取材或生后3周;第三组为CON组,及正常大鼠生后24小时内第一次腹腔注射与重组人OPG溶剂体积相同的注射用水,隔日1次,直至用于取材或生后3周;选择生后1周、3周及12周为时间点。测量量各组大鼠体重、胰腺重量、空腹血糖及空腹胰岛素水平,并观察胰岛β细胞增殖情况。为探讨机制,首先选取生后12周大鼠胰腺做为研究对象,采用Westen Blot法测各组大鼠AKT、p-AKT、FoxO1、p-FoxO1、细胞浆内FoxO1及细胞核内FoxO1的表达水平。同时本实验还以INS-1细胞为研究对象,在细胞水平上进一步探讨机制。细胞分为四组,分别是CON组,即正常培养的INS-1细胞;OPG组,即在正常培养的INS-1细胞加入重组人OPG;LY组,即在正常培养的INS-1细胞加入LY294002;LY+OPG组,即在正常培养的INS-1细胞加入LY29400及重组人OPG。细胞药物干预48小时后应用CCK-8法测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期和凋亡,细胞周期蛋白Cyclin D1和Cyclin E的表达量、细胞凋亡相关蛋白bax和bcl2的表达量以及AKT、p-AKT、FoxO1、p-FoxO1、细胞浆内FoxO1及细胞核内FoxO1的表达水平均选取Westen Blot法进行检测。所得实验结果采用SPSS21.0软件对数据进行统计学分析,计量资料以均数±标准差（x±s）表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两变量之间的相关性分析采用Penrson相关分析法进行分析。结果:1、IUGR组大鼠出生体重明显低于CON组,这种情况一直持续生后3周,哺乳期后IUGR组出现生长追赶,至生后12周时,IUGR组体重与CON组体重无明显区别。IUGR组大鼠胰腺重量及胰腺重量/体重比值在所检测的各时间点均低于CON组。IUGR大鼠在生后12周出现高胰岛素血症及胰岛素抵抗。2、HE染色结果显示,子鼠胰岛β细胞团体积在所检测的各时间点IUGR组均低于CON组。Ki67和胰岛素免疫荧光双染结果表明,在所检测的各时间点IUGR组胰岛β细胞增殖水平均低于CON组。3、Westen Blot及免疫组化结果显示,OPG在大鼠胰岛上表达,且在所检测的各时间点,IUGR组OPG蛋白表达量均明显低于CON组。Real-time PCR的结果则提示,在所检测的各时间点,IUGR组OPGmRNA表达量明显低于CON组。4、相关性分析结果显示,胰腺组织中OPG蛋白及mRNA表达水平与胰腺重量呈正相关。5、注射重组人OPG的IUGR大鼠体重与未注射OPG的IUGR大鼠相比无明显差异,但胰腺重量及胰腺重量/体重的比值大于未注射OPG的IUGR大鼠。在生后12W时,IUGR+OPG组大鼠胰岛素水平及胰岛素抵抗指数均低于IUGR组。6、在生后1周、3周及12周,IUGR组大鼠的胰岛β增殖情况均明显低于对照组,而IUGR+OPG组大鼠胰岛β细胞增殖情况较IUGR组有所改善。7、生后12周,相较于正常对照组,IUGR大鼠胰腺组织中p-AKT及p-FoxO1蛋白表达显着降低,FoxO1蛋白在胞浆中表达显着减少,而在胞核中表达增高;给予重组人OPG治疗后,IUGR大鼠胰腺组织中AKT及FoxO1的磷酸化水平显着增高,FoxO1蛋白在胞浆中表达上升,在胞核中表达下降。结果表明,给予重组人OPG后可以使IUGR大鼠胰腺中AKT及FoxO1蛋白的磷酸化水平增高,细胞核内FoxO1减少,即具有活性的FoxO1减少,进而促进胰岛β细胞增殖。8、在细胞试验中,通过CCK-8检测细胞增殖发现,重组人OPG可促进INS-1细胞的增殖,而PI3K通路抑制剂LY294002可抑制细胞的增殖,同时予重组人OPG及LY294002刺激细胞则会抑制OPG诱导的细胞增殖。进一步通过流式细胞计数检测细胞周期,结果提示,与正常对照组相比,OPG组G0/G1期比例减少,S期和G2/M期比例增加,LY组与之恰恰相反,LY+OPG组的增殖指数低于OPG组。在凋亡检测结果中发现,OPG组细胞凋亡减少,LY组凋亡明显增加,而LY+OPG组的凋亡比例明显高于OPG组。最后在细胞水平探讨OPG促进胰岛β细胞增殖的机制,本研究发现OPG组p-AKT及p-FoxO1蛋白表达水平较CON组有所上升,FoxO1蛋白在胞浆中表达增高,在胞核中表达下降;LY组与之正好相反,p-AKT及p-FoxO1蛋白表达显着下降,FoxO1蛋白在胞浆中表达显着下降,在胞核中表达显着增高;而在LY+OPG组,LY294002抑制了被OPG促进的AKT及FoxO1的磷酸化水平,使其磷酸化水平较OPG组下降,且抑制了FoxO1在胞浆中的表达,促进了其在胞核中的表达。由此推断OPG可以通过激活PI3K/AKT/FoxO1通路,使FoxO1从细胞核内转移至细胞浆,进而促进细胞增殖。结论:1、本研究通过孕期全程低蛋白饮食法成功建立IUGR大鼠模型,IUGR组大鼠的生长发育较对照组落后,体重减低,胰腺重量减轻,胰岛β细胞增殖水平下降,并在生后12周出现胰岛素抵抗。2、OPG在CON组及IUGR组大鼠胰岛上均有表达,且在生长发育的各个关键时期IUGR组大鼠胰岛中OPG蛋白及mRNA表达水平均低于CON组大鼠。3、在生后胰岛β细胞重塑期,予IUGR大鼠注射重组人OPG可以促进其胰腺发育及胰岛β细胞增殖,改善胰岛素抵抗。4、OPG可以促进INS-1细胞增殖,促使细胞周期顺利从G0/G1期向S期和G2/M期过渡,并可抑制细胞凋亡。5、OPG促进细胞增殖的过程需要PI3K/AKT/FoxO1信号通路的参与。
周桂菊[5]（2019）在《TGF-β1影响汞诱导绒毛滋养细胞凋亡的研究》文中研究表明第一部分HgCl2诱导绒毛滋养细胞凋亡的研究目的:细胞凋亡是多细胞生物体为维持内环境稳定,由基因调控的程序性细胞死亡过程,其在胚胎形成与生长发育方面具有重要作用。环境因素中的重金属暴露对发育中胚胎的影响越来越受到关注。汞是一种广泛存在于自然界的重金属,一定量的汞暴露可引起人类胚胎损伤,导致不良妊娠结局。然而汞损伤人类胚胎的机制尚不清楚。本研究拟采取不同剂量的HgCl2对人绒毛滋养细胞（HTR-8/SVneo）进行处理,研究HTR-8/Svneo细胞的凋亡情况,探讨汞暴露对人绒毛滋养细胞的影响。材料与方法:（1）培养HTR-8/SVneo细胞48小时,不同浓度HgCl2处理细胞24小时,并进行分组,空白对照组细胞未用HgCl2处理。（2）用Annexin V-FITC/7-AAD对HTR-8/SVneo细胞进行染色,流式细胞术分析细胞凋亡的变化。（3）Western Blot检测HTR-8/SVneo细胞裂解型的caspase-3,8,9表达水平。（4）TUNEL实验方法验证不同剂量HgCl2处理的HTR-8/SVneo细胞凋亡情况。（5）对检测结果进行析,组间差异比较采用t检验或单因素方差分析,以P<0.05为有统计学意义。结果:（1）不同浓度HgCl2处理HTR-8/SVneo细胞后,随着HgCl2暴露浓度增加,细胞凋亡数量明显增加,而且裂解型的凋亡蛋白酶caspase-3,8和9的表达水平明显增加,各组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）与空白对照组细胞相比,在高浓度（10μM和20μM）HgCl2处理组中,HTR-8/SVneo细胞裂解型的caspase-3,8,9的表达水平显着增加,差异有统计学意义（P<0.001）。（3）TUNEL实验验证结果表明HgCl2诱导的HTR-8/SVneo细胞凋亡呈剂量依赖性。结论:本研究采取不同剂量的HgCl2对HTR-8/Svneo细胞进行处理,发现HgCl2暴露后HTR-8/Svneo细胞凋亡增加。但高浓度的HgCl2暴露后,HTR-8/Svneo细胞中裂解型的caspase-3,8和9表达水平和细胞凋亡数量增加更显着,推测高浓度的HgCl2诱导HTR-8/SVneo细胞凋亡可能占主导地位。初步推断人类妊娠期间的汞暴露可诱导滋养细胞过度凋亡从而导致妊娠相关疾病的发生。第二部分TGF-β1在HgCl2诱导绒毛滋养细胞凋亡中的作用及机制研究目的:转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta,TGF-β1）参与调节绒毛滋养细胞的增殖、分化和入侵过程,有助于胎盘器官发育及胚胎着床。本研究通过观察TGF-β1对Hgcl2诱导滋养细胞凋亡的影响,研究Hgcl2暴露后滋养细胞丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路中多种蛋白和TGF-β活化激酶-1（TAK1）的变化及其与细胞凋亡的关系,探索TGF-β1调控Hgcl2诱导的滋养细胞凋亡的分子机制,以期为临床上进一步研究汞暴露引起滋养细胞凋亡相关的胚胎损伤的分子指标物和潜在干预措施提供理论依据。材料与方法:（1）不同浓度HgCl2和/或TGF-β1处理HTR-8/SVneo细胞24小时,并进行分组,空白对照组细胞未采用任何试剂处理。（2）Western Blot、q RT-PCR检测细胞TGF-β1表达水平,Annexin V-FITC/7-AAD染色验证分析细胞凋亡情况。Western Blot检测细胞裂解型的caspase-3,8,9表达水平。（3）磷酸-Thr 187 TAK1抗体免疫染色测定分析细胞TAK1表达量和活性变化。TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol降调TAK1,Annexin V-FITC/7-AAD染色检测分析细胞调亡情况。Western Blot检测caspase-3与裂解型caspase-3表达水平。（4）构建TAK1质粒,转染HTR-8/SVneo细胞上调TAK1,Annexin V-FITC/7-AAD染色检测分析细胞凋亡变化。Western Blot检测分析caspase-3,裂解型caspase-3,P38及p-P38表达水平变化。（5）Western Blot检测MAPK信号通路蛋白p-JNK,p-ERK和p-P38表达水平。MAPK抑制剂下调信号通路蛋白,流式细胞术检测分析细胞凋亡变化。Western Blot检测裂解型的caspase-3,8,9表达水平。（6）分析检测结果,组间差异比较采用t检验或单因素方差分析,以P<0.05为有统计学意义。结果:（1）随着HgCl2处理浓度的增加,逐渐降低了滋养细胞TGF-β1的表达。在HTR-8/SVneo细胞中用TGF-β1联合HgCl2处理后,在一定程度上减弱了HgCl2诱导滋养细胞凋亡。（2）HgCl2处理组滋养细胞p-JNK,p-ERK和p-P38的表达水平明显高于空白对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。HgCl2联合TGF-β1处理组滋养细胞p-JNK,p-ERK和p-P38的表达水平显着低于HgCl2处理组（P<0.01）,裂解型的caspase-3,8,9相对表达水平与HgCl2处理组相比亦显着降低。（3）与空白对照组相比,JNK,ERK和P38抑制剂可使滋养细胞p-JNK,p-ERK和p-P38的表达水平明显降低（P<0.05）。然而,JNK和ERK抑制剂对HgCl2诱导的滋养细胞凋亡不产生影响（P>0.05）。但P38抑制剂SB202190能显着降低HgCl2诱导的滋养细胞凋亡和凋亡蛋白酶的活化（P<0.01）。（4）TGF-β1可激活HTR-8/SVneo细胞TAK1的表达,使滋养细胞凋亡程度下降。而降调TAK1可显着减弱TGF-β1抑制HgCl2诱导的滋养细胞凋亡作用（P<0.01）。（5）通过质粒转染过表达HTR-8/SVneo细胞TAK1,可显着降低HgCl2诱导的滋养细胞凋亡（P<0.01）。结论:TGF-β1对HgCl2诱导的滋养细胞凋亡具有调节作用,可能经p38 MAPK信号通路在一定程度上抑制了HgCl2诱导的HTR-8/SVneo细胞凋亡,并可能涉及TAK1的表达。这些结果可能为临床上进一步研究汞暴露引起的滋养细胞相关的胚胎损伤分子指标物和潜在的干预措施提供理论依据。
韩璐阳[6]（2019）在《链脲佐菌素诱导妊娠期糖尿病大鼠海马PTPRT基因甲基化修饰调控子代学习记忆能力机制的初步探究》文中提出第一部分 GDM宫内环境改变对子代学习记忆能力的影响目的:建立GDM模型,探究GDM宫内环境改变对子代学习记忆能力的影响。方法:将怀孕的SD大鼠随机分为对照组和GDM组,其中GDM组在孕5天尾静脉注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）,对照组在孕5天尾静脉注射柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液;所有孕鼠于孕13、16和19天分别称重1次。于孕0、7和14天基于ELISA实验进行孕鼠血糖及血胰岛素水平检测。分娩后检测出生时子代羊水中的促红细胞生成素（Erythropoietin,EPO）值,判定GDM宫内环境导致胎儿缺氧的程度。将两组子鼠分别在8周龄和1岁龄进行Morris水迷宫试验,利用Morris水迷宫模型检测GDM对子代空间学习记忆能力的影响。结果:1.孕鼠在孕6天和13天晚8:00后禁食,于孕7天和孕14天上午8:00～9:00尾尖采血测空腹血糖,孕7天血糖较孕前升高20%以上且≤16.65 mmol/L（达到轻度高血糖标准者）定义为造模成功,纳入GDM组;2.与对照组相比,GDM组孕13、16、19天的体重（Body weight）显着增加（P<0.05,P<0.01,P<0.01）;孕 7、14 天空腹血糖（Fasting blood glucose,FBG）及空腹胰岛素（Fasting insulin,FINS）均显着升高（P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01）;GDM组同胎生仔数及子鼠出生体重较对照组显着降低（P<0.01,P<0.01）,而GDM组羊水中的EPO含量显着高于对照组（P<0.01）。3.Morris水迷宫试验中,GDM子代大鼠8周龄组总体表现显着弱于健康对照组,在逃避潜伏期的时长和游泳距离均长于对照组（P均<0.01）;而在空间探索期内经过平台原位置的次数和目标象限停留的时间均显着少于对照组（P<0.01,P<0.05）;当子代年龄增长至1周岁时,再次进行该实验,发现两组上述四项指标均无显着差异（P均>0.05）。结论:本实验成功建立GDM子代模型,通过Morris水迷宫实验发现GDM宫内环境在子代8周龄时对空间学习记忆能力产生不良影响,即GDM组子代在空间学习记忆能力方面表现明显不如正常对照组子代,但这种差异在子代1周岁时基本得到改善。第二部分GDM宫内环境影响子代学习记忆能力的关键基因目的:筛选并验证GDM宫内环境影响子代学习记忆能力的关键基因。方法:按照第一部分研究方案建立GDM和对照组子代大鼠模型,提取GDM与正常妊娠子代大鼠海马组织的全基因组DNA,制备MeDIP-seq文库,进行全基因组测序。获得原始数据后筛选出高质量数据。使用KOBAS软件将差异序列定位到基因元件上。采用BOWTIE软件将所得序列与参考基因组进行比对,将可比对的序列信息使用MACS软件识别单个样本的甲基化DNA免疫共沉淀（Methylated DNA immunoprecipitation,MeDIP）峰进行差异甲基化基因分析。筛选出候选甲基化特异性关键基因,并进行甲基化特异性候选基因的MSP（Methylation specific PCR）,同时行实时荧光定量PCR反应扩增和Western Blot验证。将原代海马神经元细胞分离培养,利用5-杂氮脱氧胞苷抑制DNA甲基化再提取蛋白,用Western Blot法检测关键基因的蛋白表达水平,探究甲基化对关键基因表达情况的抑制作用。结果:1.与对照组相比,GDM组中特异性差异甲基化基因（Specific-difference methylation genes,DMG）为256个,其中180个基因发生了低甲基化,76个基因发生了高甲基化。通过测序结果和文献检索,从中筛选出PTPRT、PP2BA、SLC2A1、PPP1CA、ESR2五个基因作为GDM子代海马组织中甲基化差异性基因候选关键基因。2.甲基化特异性PCR的结果显示,PTPRT基因在对照组的5个样品中均扩增出非甲基化条带,而在GDM组中,均扩增出甲基化条带,PTPRT基因的甲基化水平在五种关键基因中最为显着。3.实时荧光定量PCR结果显示,GDM组五种候选关键基因PTPRT、PP2BA、SLC2A1、PPP1CA、ESR2的转录水平均低于对照组（P均<0.01）,但PTPRT的转录水平降低最为显着。4.在GDM组五种候选关键基因PTPRT、PP2BA、SLC2A1、PPP1CA、ESR2的蛋白表达量中,PTPRT的表达水平明显低于对照组。5.GDM组原代细胞中PTPRT表达受到抑制;利用5-杂氮脱氧胞苷抑制DNA甲基化,可见GDM组原代细胞中的PTPRT表达水平得到部分恢复。结论:GDM子鼠脑组织中存在特异性差异甲基化基因,PTPRT基因与GDM组甲基化有较好的相关性。PTPRT基因是否与GDM大鼠子代学习记忆能力有关有待进一步实验证实。第三部分 PTPRT基因对大鼠海马神经元细胞周期及凋亡的影响和分子机制研究目的:探究PTPRT基因对大鼠海马神经元细胞周期及凋亡的影响和分子机制。方法:设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术调取目的基因CDS区分别构建过表达质粒载体和干扰质粒载体,并进行包装与浓缩纯化,使其转染大鼠海马神经元细胞,将实验对象分为4组,分别为（1）过表达对照组（Vector组）:（2）过表达PTPRT组（EGFP-PTPRT组）:（3）敲减对照组（siNC）:（4）敲减PTPRT组（PTPRT-siRNA 组）。分别利用 mRNA qRT-PCR 检测 mRNA相对表达量,通过Western Blot检测蛋白表达水平,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况,从而观察各组PTPRT基因表达情况及对大鼠海马神经元细胞周期及凋亡的影响和分子机制。结果:1.Western Blot结果显示敲减PTPRT组细胞分裂S期标志性蛋白CycinA的含量明显低于敲减对照组,过表达PTPRT组Cyclin A的含量则较过表达对照组稍高。2.流式细胞分析发现,PTPRT过表达组处于细胞分裂期（S期）的细胞较过表达对照组（Vector组）明显增多,敲减PTPRT组处于S期细胞明显低于敲减对照组。3.mRNA qRT-PCR检测结果显示,EGFP-PTPRT组中大鼠海马神经元细胞中的凋亡拮抗蛋白Bcl-2的相对mRNA表达量显着高于Vector组（1.30±0.09 vs 1.00±0.04,P<0.01）,而凋亡相关蛋白BAX的相对mRNA表达量显着低于Vector组（0.69±0.09 vsl.00±0.02,P<0.01）。PTPRT-siRNA 组大鼠海马神经元细胞中的Bcl-2 相对 mRNA 表达量显着低于 siNC 组（0.64±0.08 vs 0.98±0.06,P<0.01）,BAX 的相对 mRNA 表达量显着高于 siNC 组（1.29±0.08vs0.98±0.04,P<0.01）。4.通过Westem Blot进行凋亡相关蛋白表达水平分析发现,PTPRT-siRNA组的BCL-2基因的蛋白表达水平显着低于包括siNC对照组在内的其余三组;而促凋亡蛋白 BAX,Cleaved-Caspase-3 和 Cleaved-Caspase-9 表达量高于其余三组。PTPRT过表达组则与之相反。5.PTPRT过表达（EGFP-PTPRT组）能促进STXBP1及Syntaxin1的结合,使后两者表达水平上升;敲降PTPRT（PTPRT-siRNA组）则抑制了 和STXBP1及Syntaxin1的结合,使后两者表达水平下降。结论:过表达PTPRT基因可提高大鼠海马神经元中处于细胞分裂S期细胞的比例,拮抗对大鼠神经元细胞凋亡,增加STXBP1及Syntaxin1表达水平。相反,敲减PTPRT基因能降低大鼠海马神经元中处于细胞分裂S期细胞的比例,促进大鼠神经元细胞凋亡,降低STXBP1及Syntaxin1表达水平。第四部分 PTPRT基因对GDM子代学习记忆能力作用研究目的:探究PTPRT基因对GDM子代学习记忆能力的作用。方法:构建连接PTPRT基因的病毒质粒载体,进行大鼠侧脑室插管手术,待其清醒后恢复5-7天后进行Morris水迷宫试验。水迷宫试验前将子代大鼠分为4组进行侧脑室药物注射,4组名称和注射药物分别为（1）对照组:正常子代大鼠,侧脑室注射人工脑脊液;（2）GDM模型组:GDM子代大鼠,侧脑室注射人工脑脊液;（3）慢病毒对照组:GDM子代大鼠,侧脑室注射空载质粒;（4）慢病毒过表达PTPRT组:GDM子代大鼠,侧脑室注射连接有PPTPRT基因的慢病毒质粒。记录Morris水迷宫试验相应指标,借此探索PTPRT基因对GDM子代大鼠学习能力的影响,待实验结束后处死大鼠取出其脑组织,并通过Western Blot验证各组子代大鼠PTPRT及其下游Syntaxin 1,STXBP1蛋白表达情况。结果:1、GDM组相比对照组在D1、D2、D3、D4天定向导航试验的逃避潜伏期明显延长（P<0.0001,P<0.0001,P<0.0001,P<0.001）;过表达组（GDM+PTRRT）D1、D2、D3天定向导航试验显着小于GDM+Vector组时长,但在D4天时与GDM+Vector组时长相当（P<0.001,P<0.001,P<0.001,P>0.05）;GDM 组相比对照组在 D1、D2、D3、D4天定向导航试验的游泳距离明显延长（P<0.01,P<0.0001,P<0.0001,P<0.01）;过表达组（GDM+PTRRT）组在D1、D2、D3天定向导航试验的游泳距离显着小于GDM+Vector组时长,但在D4天时与GDM+Vector组游泳距离无显着差异（P<0.05,P<0.01,P<0.05,P>0.05）。2、Morris水迷宫空间探索实验中,GDM子代大鼠组进入目标区域的次数显着低于对照组（P<0.0001）;而GDM+PTPRT过表达组进入目标区域的次数明显高于过表达对照组（P<0.05）;GDM子代大鼠组目标象限的停留时间组比对照组子代明显缩短（P<0.0001）;GDM+PTPRT过表达组停留在目标象限的时间较GDM组则显着延长（P<0.05）。3、各组PTPRT表达水平均符合其典型Western Blot表现。GDM组PTPRT、Syntaxin 1和STXBP1表达含量较对照组下降;而在过表达PTPRT载体组中,可以观察到Syntaxin 1和STXBP1含量略高于GDM组。结论:PTPRT基因的甲基化与GDM子代大鼠学习记忆能力下降有关,PTPRT基因的过表达能部分改善GDM子代大鼠的学习记忆能力,可能与PTPRT基因过表达使Syntaxin 1和STXBP1上调有关,涉及的具体机制有待进一步研究。总结:本研究从基因、转录、蛋白及行为实验多层次多维度地揭示了 GDM子代大鼠海马神经元中PTPRT基因的甲基化与子代空间学习能力下降的关系,并初步验证过表达PTPRT基因可部分改善GDM子代大鼠的空间学习记忆能力。为进一步揭示GDM的发病机制和GDM及相关并发症的预防及治疗奠定了一定的理论基础。
蔡恒,李智文,滕佩宏,贾童童,王越,张永镇,于向民,王东[7]（2019）在《胎盘组织中CYP1A1表达在孕期香烟烟雾暴露致胎鼠宫内发育迟缓中的作用》文中提出目的探讨CYP1A1在孕期暴露香烟烟雾所致宫内发育迟缓（IUGR）胎鼠胎盘组织中的表达及其意义。方法在自制熏烟箱中制备IUGR模型,比较模型组和正常对照组胎盘中的药物代谢酶CYP1A1及细胞凋亡相关蛋白的表达量差异。结果 IUGR模型组胎鼠的平均体重、身长、胎盘重量均明显低于对照组（P均<0. 001）。免疫组织化学结果显示,与对照组相比,模型组胎盘中CYP1A1表达量升高,Bcl2蛋白在胎盘中的表达降低（P <0. 001）,BAX蛋白表达增高（P <0. 001）。结论孕期吸烟可致金黄地鼠胎盘药物代谢酶表达升高,提示香烟烟雾中有害物质可以通过母体到达胎盘,引起胎盘细胞的死亡,影响胎盘的发育,最终导致IUGR。
杜鑫[8]（2018）在《川续断皂苷Ⅵ调控滋养细胞PR、PSG1及凋亡机制研究》文中提出自然流产（SA）是指临床妊娠28周以前发生的流产,是妇产科常见的生殖障碍疾病,其中早期自然流产是指临床妊娠12周以前发生的流产。一直以来,学术界对自然流产的研究从未间断,尤其随着国家全面开放二胎政策,自然流产的发病率逐渐增加,其发病机制尚未完全明确。滋养细胞在早期妊娠起到重要作用,有很多研究表明滋养细胞功能的失调可导致自然流产,如滋养细胞侵袭功能不足易引发自然流产,其凋亡增多及增殖不足则可导致自然流产的发生,因此滋养细胞作为研究自然流产机制的常用细胞。孕激素在临床上是妊娠后常规检测的指标,孕酮是临床治疗先兆流产的常用药物,而孕酮功能的发挥离不开PR,因此PR在早期妊娠中有重要意义。妊娠特异蛋白（PSG）是在妊娠期间由细胞和合体滋养细胞产生的,它是一个蛋白家族,其中PSG1是课题组前期通过基因芯片筛选SA患者及正常早孕者绒毛组织中有明显差异的一个基因。寿胎丸是临床常用于补肾安胎的药物,其中续断是安胎药物代表,课题组前期研究川续断皂苷Ⅵ在蜕膜细胞中可以通过Notch通路提高PR表达。因此基于课题组前期研究,本课题选用美国ATCC细胞库中人的早期妊娠滋养细胞株HTR8/Svneo进行细胞功能的实验,主要研究川续断皂苷Ⅵ是否对流产模型滋养细胞的凋亡功能有影响,以及滋养细胞中PR、PSG1表达是否与凋亡有关,从而解释自然流产的机制。目的:研究自然流产患者绒毛组织与正常早孕人工流产者绒毛组织的PR、PSG1、p-Akt、Bax、Bcl-2蛋白表达差异,用米非司酮（RU486）诱导HTR8/Snveo滋养细胞构建流产及凋亡状态模型,探讨川续断皂苷Ⅵ对自然流产模型的滋养细胞PR、PSG1的表达及凋亡功能的影响,同时探讨PR、PSG1与Akt通路及凋亡的调控关系,并明确川续断皂苷Ⅵ对PR、PSG1表达的影响。方法:1.体内研究。通过qRT-PCR、WB实验方法进行临床筛查及验证绒毛组织中PR、PSG1及凋亡的基因、蛋白表达差异。2.体外研究。RU486诱导滋养细胞流产与凋亡模型的建立。采用不同浓度RU486诱导滋养细胞不同时间,通过CCK8增殖-凋亡实验、流式细胞术、Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡情况,通过WB检测PR、PSG1、p-Akt及凋亡蛋白表达情况,以确定模型的建立。川续断皂苷Ⅵ对SA模型滋养细胞的PR、PSG1及凋亡的表达影响。基于RU486诱导滋养细胞自然流产及凋亡模型,通过CCK8、Annexin V/PI染色、Hoechst33258荧光染色检测川续断皂苷Ⅵ对滋养细胞凋亡的影响,通过WB检测川续断皂苷Ⅵ对模型滋养细胞PR、PSG1、p-Akt及凋亡蛋白表达的影响。PR、PSG1通过PI3K/Akt通路调控凋亡的机制。通过转染PR si RNA、PSG1 si RNA,采用qRT-PCR方法检测转染效率,同时观察PR、PSG1及凋亡基因表达变化,并采用WB方法观察滋养细胞PR、PSG1及凋亡蛋白的变化。抑制PI3K/Akt,采用WB方法观察滋养细胞PR、PSG1及凋亡蛋白的变化。川续断皂苷Ⅵ对PR、PSG1蛋白的靶向作用影响。通过川续断皂苷Ⅵ分别作用于已转染PR si RNA和PSG1 si RNA的细胞,采用WB检测对应转染后细胞的PR、PSG1蛋白表达。结果:1.体内研究。SA患者绒毛组织中PR、PSG1表达减少,Akt通路下调,Bcl-2表达下调,Bax表达上调。qRT-PCR检测SA患者的绒毛组织中PR、PSG1、Bcl-2 m RNA较正常早孕人工流产患者的绒毛组织的表达显着降低,Bax m RNA显着增多,差异均具有统计学意义（P<0.001）。WB检测SA患者的绒毛组织中PR、PSG1、p-Akt、Bcl-2蛋白较正常早孕人工流产患者的绒毛组织的表达显着降低,Bax蛋白显着增多,差异均具有统计学意义（P<0.05）。2.体外研究。RU486诱导滋养细胞流产与凋亡模型的建立。通过CCK8、流式细胞术、Hoechst33258荧光染色、WB等实验方法,将不同浓度RU486作用于HTR8/Svneo滋养细胞不同时间,造成自然流产及凋亡模型。各检测方法均说明RU486作用滋养细胞浓度越大,时间越长,细胞生长活力越低,早期及总凋亡率越高,妊娠蛋白PR、PSG1表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,PI3K/Akt通路受到抑制,差异均具有统计学意义（P<0.05）。因此,RU486可降低滋养细胞PR、PSG1表达,抑制Akt通路而促进凋亡发生,建立造模方法成功。最终得到RU486造模最佳浓度为50μmol/L,CCK8、Annexin V/PI双染色流式细胞术、Hoechst33258染色实验检测造模最佳时间均为24h,WB检测蛋白造模最佳时间为8h。川续断皂苷Ⅵ对SA模型滋养细胞PR、PSG1及凋亡表达的影响。通过CCK8、Annexin V/PI双染色流式细胞术、Hoechst33258荧光染色、WB实验方法,将川续断皂苷Ⅵ作用于RU486诱导流产及凋亡模型的滋养细胞中,各检测方法的结果均显示ASA VI可以增加滋养细胞生长活力,降低早期凋亡率,差异均具有统计学意义（P<0.05）。川续断皂苷Ⅵ可增加妊娠蛋白PR、PSG1表达,激活PI3K/Akt通路,并增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达,降低促凋亡蛋白Bax表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。PR、PSG1通过PI3K/Akt通路调控凋亡的机制。转染PR si RNA后,Bcl-2、p-Akt蛋白表达减少,Bax蛋白表达增多,差异均具有统计学意义（P<0.05）,其中PSG1蛋白的变化无统计学意义（P>0.05）,则说明PR没有直接调控PSG1。转染PSG1 si RNA后,PR、Bcl-2、p-Akt蛋白表达减少,Bax蛋白表达增多,差异均具有统计学意义（P<0.05）,说明PSG1可调控PR的表达,进而通过Akt通路调控Bcl-2、Bax影响凋亡发生。抑制Akt后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增多,差异均具有统计学意义（P<0.05）,说明Akt可调控滋养细胞凋亡功能。综上可知,PSG1可以调控PR表达,并通过Akt通路影响Bcl-2、Bax表达,从而影响滋养细胞的凋亡功能。结论:1.自然流产患者绒毛组织PR、PSG1蛋白表达降低,并出现明显的凋亡现象。2.RU486可以诱导HTR8/Svneo细胞构建体外自然流产模型,且RU486浓度越高,作用时间越长,HTR8/Svneo细胞生长活力越低,凋亡率越高,具有浓度依赖性和时间依赖性,其造模最佳浓度为50μmol/L。3.PSG1可以调控PR表达,PR可以激活Akt通路进一步调控Bcl-2、Bax表达,影响凋亡的发生。说明PSG1、PR对自然流产凋亡的发生起到重要作用。4.川续断皂苷Ⅵ可以促进模型细胞增殖,降低其凋亡率,同时靶向增加PSG1、PR表达,通过激活Akt信号通路上调Bcl-2表达、下调Bax表达起到防治流产及安胎的药理作用。
刘磊[9]（2018）在《ANGPTL4介导PPARγ激活剂在子痫前期病理过程中的保护性作用》文中进行了进一步梳理【目的】（1）为了探索过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ）激动剂罗格利酮（rosiglitazone）对滋养细胞HTR8/SVneo、人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）和胎盘外植体中PPARγ表达和血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4）表达和分泌的影响以及PPARγ在其中发挥的作用。（2）为进一步研究rosiglitazone诱导HTR8/SVneo、HUVECs细胞和胎盘外植体中ANGPTL4表达和分泌的分子调控机制。（3）研究正常妊娠孕妇和子痫前期患者胎盘组织中PPARγ和ANGPTL4表达以及血清中PPARγ循环激活剂的水平和ANGPTL4的分泌情况并统计分析二者之间的相关性。（4）研究ANGPTL4和PPARγ在滋养细胞HTR8/SVneo增殖和过氧化氢诱导的凋亡过程中的作用。（5）探索ANGPTL4和PPARγ在滋养细胞HTR8/SVneo迁移和侵袭以及胎盘外植体生长中的作用。（6）研究ANGPTL4和PPARγ在内皮细胞血管形成过程中的作用。【方法】（1）使用不同浓度的rosiglitazone处理HTR8/SVneo、HUVECs细胞和胎盘外植体,通过Western blotting、qRT-PCR、ELISA和免疫荧光检测其中PPARγ和ANGPTL4的mRNA和蛋白表达情况以及ANGPTL4的分泌;通过小干扰RNA沉默PPARγ的表达,进一步通过上述实验检测PPARγ在rosiglitazone诱导的ANGPTL4表达和分泌中的作用。（2）通过软件预测ANGPTL4启动子上潜在的PPARγ/RXRα结合位点,通过染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,ChIP）实验在HTR8/SVneo、HUVECs细胞和胎盘外植体中确认具体的PPARγ/RXRα结合位点。（3）收集上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科诊治的30例正常妊娠孕妇和30例子痫前期患者的胎盘组织、血液和临床资料,通过免疫组化、Western blotting、qRT-PCR和ELISA检测胎盘组织中PPARγ和ANGPTL4的表达以及血清中PPARγ循环激活剂的水平和ANGPTL4的分泌情况并统计分析二者之间的相关性。（4）使用rosiglitazone处理转染si-Con或siANGPTL4的HTR8/SVneo细胞,通过TUNEL、CCK-8、Western blotting和qRTPCR实验检测rosiglitazone和ANGPTL4在HTR8/Svneo生存和增殖中作用以及与细胞增殖和凋亡相关基因的表达;此外,通过免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中与凋亡相关蛋白caspase-3和增殖相关蛋白cyclin D1的表达情况。（5）使用rosiglitazone处理转染si-Con或者si-ANGPTL4的HTR8/SVneo细胞,通过划痕实验、transwell侵袭实验、胎盘绒毛外植体模型和Western blotting检测rosiglitazone和ANGPTL4在滋养细胞迁移、侵袭和胎盘绒毛外植体生长中的作用以及MMP2和MMP9的表达;与此同时,通过免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中MMP2和MMP9的表达。（6）使用rosiglitazone处理转染si-Con或者siANGPTL4的HUVECs细胞,通过血管形成实验、Western blotting、qRT-PCR和ELISA检测rosiglitazone和ANGPTL4在内皮细胞HUVECs血管形成中的作用以及VEGF的表达和分泌情况;此外,通过免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中PPARγ、ANGPTL4、CD31和VEGF的表达。【结果】（1）Rosiglitazone能够以浓度依赖的方式上调HUVECs细胞、HTR8/SVneo细胞和胎盘外植体中PPARγ和ANGPTL4的mRNA和蛋白水平的表达以及ANGPTL4的分泌;沉默PPARγ抑制rosiglitazone诱导的ANGPTL4的表达和分泌。（2）在ANGPTL4启动子区域存在3个潜在的PPARγ/RXRα结合位点,分别为:PPRE1（-1822/-1808）,PPRE2（-809/-795）和PPRE3（-233/-209）;ChIP实验结果证实:PPARγ/RXRα在ANGPTL4启动子的结合位点为PPRE3（-233/-209）。（3）相对于正常妊娠孕妇,子痫前期患者胎盘组织中PPARγ和ANGPTL4表达是显着减少;相似地,子痫前期患者血清中PPARγ循环激活剂的水平和ANGPTL4的分泌也是显着少于正常孕妇;统计分析还显示:两组孕妇胎盘组织中PPARγmRNA的表达与相应胎盘组织和血清中ANGPTL4的表达和分泌水平成正相关。（4）TUNEL实验、CCK-8实验、Western blotting和qRT-PCR研究结果显示:相对于对照组,rosiglitazone处理明显促进了HTR8/SVneo的增殖以及cyclin D1、c-Myc、Bcl-2和pHH3的表达;抑制了过氧化氢诱导的HTR8/SVneo的凋亡以及cleaved PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、caspase-3和caspase-9的表达;沉默ANGPTL4表达,rosiglitazone对HTR8/Svneo的这些作用将被阻断;对胎盘组织的免疫组化检测进一步证实:相对正常妊娠孕妇胎盘,PPARγ和ANGPTL4低表达的子痫前期患者胎盘中caspase-3表达是增加的,而Cyclin D1的表达是减少的。（5）细胞划痕实验、transwell侵袭实验和胎盘外植体实验结果表明:相对于对照组,rosiglitazone明显促进了HTR8/SVneo细胞的迁移和侵袭以及胎盘外植体的生长;Western blotting和明胶酶谱实验显示:相对于对照组,rosiglitazone明显促进了HTR8/SVneo中MMP2和MMP9的表达,抑制了TIMP-1和TIMP-2的表达;沉默ANGPTL4的表达,抑制了rosiglitazone的这些作用;除此之外,对胎盘组织的免疫组化检测也证实:相对正常妊娠孕妇的胎盘,PPARγ和ANGPTL4低表达的子痫前期患者胎盘中MMP2和MMP9表达也是减少的。（6）血管形成实验表明:相对于对照组,rosiglitazone明显促进了HUVECs细胞的血管形成;Western blotting、qRT-PCR和ELISA实验显示:相对于对照组,rosiglitazone显着促进了HUVECs中VEGF的表达和分泌;沉默ANGPTL4的表达,抑制了rosiglitazone的这些作用;更重要的是,进一步的胎盘组织的免疫组化检测表明:相对正常妊娠孕妇胎盘,PPARγ和ANGPTL4低表达的子痫前期患者胎盘中VEGF和CD31表达也是减少的。【结论】（1）Rosiglitazone通过PPARγ诱导ANGPTL4的表达和分泌。（2）ANGPTL4是PPARγ的一个靶基因,PPARγ/RXRα二聚体能够结合到ANGPTL4的启动子,促进其转录激活。（3）相对于正常妊娠孕妇,子痫前期患者胎盘组织中PPARγ和ANGPTL4的表达以及血清PPARγ循环激活剂的水平和ANGPTL4的分泌是减少的。（4）ANGPTL4介导rosiglitazone诱导的滋养细胞HTR8/SVneo的生存和增殖。（5）对于rosiglitazone诱导的HTR8/SVneo的迁移和侵袭以及胎盘外植体的生长,ANGPTL4是一个重要的介导者。（6）ANGPTL4参与rosiglitazone诱导的HUVECs细胞的血管形成。
彭永保[10]（2017）在《孕中期热暴露影响胚胎宫内发育中HSP70的作用及其机制的初步研究》文中提出目的:1.妊娠第8-13天对孕鼠进行热暴露,探索孕中期热暴露对子代宫内发育、HSP70表达及胎盘细胞凋亡的影响。2.构建SD大鼠HSP70过表达及干扰表达腺病毒载体,检测其在SD孕鼠体内诱导或干扰循环及胎盘组织HSP70表达的效果。3.人为诱导或干扰孕鼠HSP70的表达,然后将其进行孕中期热暴露,探讨HSP70表达对热暴露胚胎的影响及参与机制。4.高温与子宫血流灌注不足都是FGR的重要发病因素,通过观察比较孕中期热暴露、子宫缺血及热暴露后子宫缺血对胚胎和胎盘发育的影响,以及胎盘与循环HSP70的变化,探讨孕中期热暴露在FGR病因学中的影响机制。方法:1.将24只SD孕鼠随机分为2组。对照组:孕期全程在（23±1℃）的环境中饲养;热暴露组:孕早期在（23±1℃）的环境中饲养,妊娠第8天至第13天进行热暴露,热暴露结束后回归（23±1℃）的环境中饲养,在妊娠第1、8、14、21天测量并记录孕鼠的体重。在妊娠第21天,两组所有孕鼠用0.3%戊巴比妥麻醉后行剖腹取胎,并从腹主动脉采血3ml。测量存活胎鼠的数量、体重、性别、身长、尾长、有无畸形、胎盘重量及死胎数,采用Western blotting检测胎盘HSF70、Bax、Bc L-2的表达及ELISA检测血浆HSP70水平。2.将12只SD孕鼠随机分为3组。在妊娠第8天,对照组孕鼠尾静脉注射空载腺病毒穿梭质粒,过表达组注射HSP70重组腺病毒表达载体,干扰表达组注射HSP70重组腺病毒干扰载体,各组病毒感染剂量均为2.5×109 PFU/kg。然后将三组孕鼠放置于温度（35±1?C）的环境中进行热暴露,感染病毒4天后处死孕鼠,采用Western blotting检测胎盘组织HSP70蛋白表达和ELISA检测孕鼠血浆HSP70水平以验证过表达或干扰表达HSP70腺病毒载体的效果。3.将30只SD孕鼠随机分为3组。在妊娠第8天,对照组尾静脉注射空载腺病毒穿梭质粒,过表达组注射HSP70重组腺病毒表达载体,干扰表达组注射HSP70重组腺病毒干扰载体,各组病毒感染剂量均为2.5×109PFU/kg。然后进行热暴露,妊娠第14天回归（23±1?C）的环境中饲养,妊娠第21天三组孕鼠用0.3%戊巴比妥麻醉后行剖腹取胎,并从腹主动脉采血3ml。测量存活胎鼠的数量、体重、性别、身长、尾长、有无畸形、胎盘重量及死胎数,采用Western blotting检测胎盘HSF70、Bax、Bc L-2的表达及ELISA法检测血浆HSP70水平。分析胎鼠发育与胎盘、血浆HSP70表达的变化关系。4.将36只SD孕鼠随机分为3组。热暴露组（Ⅰ组）:孕早期在（23±1℃）的环境中饲养,妊娠第8天至第13天进行热暴露,然后回归（23±1℃）的环境中饲养;子宫缺血组（Ⅱ组）:孕期全程在（23±1℃）的环境中饲养,妊娠第14天行双侧子宫动静脉部分结扎;热暴露后子宫缺血组（Ⅲ组）:孕早期在（23±1℃）的环境中饲养,妊娠第8天至妊娠第13天进行热暴露,然后行双侧子宫动静脉部分结扎后回归（23±1℃）的环境中饲养。在妊娠第21天行剖腹取胎,并从腹主动脉采血3ml。测量存活胎鼠的数量、体重、性别、身长、尾长、有无畸形、胎盘重量及死胎数,采用Western blotting检测胎盘HSF70、Bax、Bc L-2的表达及ELISA法检测血浆HSP70水平。分析胎鼠发育与胎盘、血浆HSP70表达的变化关系。结果:1.研究一结果:热暴露组孕鼠妊娠第21天体重及孕期体重增加值均小于对照组,且差异均有统计学意义（均P<0.05）;热暴露组胎鼠的体重、身长、尾长均小于对照组,且差异均有统计学意义（均P<0.05）;热暴露组的胎鼠出生性别比高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;热暴露组的HSP70表达及Bax/Bcl-2比值均高于对照组,差异均有统计学意义（均P<0.05）;热暴露组孕鼠血浆HSP70的水平高于对照组,且差异有统计学意义（P<0.05）。2.腺病毒载体效果验证结果:HSP70过表达载体组的循环HSP70水平高于对照组和干扰表达载体组,且差异均有统计学意义（P<0.05）,干扰HSP70表达组的血浆HSP70水平低于对照组,差异也有统计学意义（P<0.05）;HSP70过表达载体组的胎盘HSP70的表达高于对照组和干扰表达载体组,且差异均有统计学意义（P<0.05）,干扰表达载体组的胎盘HSP70表达低于对照组,差异也有统计学意义（P<0.05）。3.研究二结果:HSP70过表达组的胎死率低于对照组和干扰表达组,且差异均有统计学意义（P<0.05）,干扰表达组与对照组胎死率的比较差异无统计学意义（P>0.05）;过表达组子代性别比最高,干扰表达组的性别比最低,且三组孕鼠子代出生性别比的比较差异均有统计学意义（均P<0.05）;HSP70过表达组的胎盘重量高于对照组与干扰表达组,且差异均有统计学意义（均P<0.05）;干扰表达组的胎盘重量低于对照组,差异同样有统计学意义（P<0.05）;三组胎盘组织HSP70表达的水平为:过表达组最高,对照组次之,干扰表达组最低,且它们组间比较的差异均有统计学意义（均P<0.05）;三组胎盘组织Bax与Bcl-2的比值（Bax/Bcl-2）为干扰表达组最高,对照组次之,过表达组最低,且它们组间比较的差异均有统计学意义（均P<0.05）;过表达组孕鼠血浆HSP70水平低于对照组和干扰表达组,且比较差异均有统计学意义（均P<0.05）,但干扰表达组孕鼠血浆HSP70水平与对照组的比较差异无统计学意义（P>0.05）。4.研究三结果:热暴露后子宫缺血组孕鼠妊娠第21天体重及孕期体重增加值均低于其余两组,且比较差异均有统计学意义（均P<0.05）,热暴露组和子宫缺血组孕鼠妊娠第21天体重及孕期体重增加值的比较差异均无统计学意义（P>0.05）;热暴露后子宫缺血组的胎死率高于其余两组（均P<0.05）;热暴露后子宫缺血组的胎盘重量低于其余两组,且差异均有统计学意义（均P<0.05）;三组胎盘组织HSP70表达水平的组间比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;三组胎盘组织Bax与Bcl-2的比值（Bax/Bcl-2）为热暴露后子宫缺血组最高,子宫缺血组次之,热暴露组最低,且它们组间比较的差异均有统计学意义（均P<0.05）。热暴露组和子宫缺血组孕鼠血浆HSP70水平无显着差异（P>0.05）,但热暴露后子宫缺血组血浆HSP70水平高于其余两组,且差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论:1.孕中期（35±1℃）热暴露会给孕鼠子代的宫内生长发育带来不利影响。2.p AD-CMV-HSP70重组腺病毒表达载体与U6-sh RNA-loop-anti-sh RNAteminator-UBC-e GFP-HSP70重组腺病毒干扰载体用于提高或干扰孕鼠循环及胎盘HSP70的表达是可行的。3.诱导孕中期热暴露孕鼠HSP70高表达可以有助于胎盘的发育,降低胎死率;干扰孕中期热暴露孕鼠HSP70表达则会影响胎盘的生长发育。4.胎盘HSP70表达水平与子代胎死率密切相关,推测胎盘HSP70高表达具有促进胎盘生长及提高胚胎存活率的作用。5.孕中期热暴露后子宫缺血会严重影响胎盘及胚胎的宫内发育。与细胞内HSP70不同,母体循环中HSP70水平的升高会给胚胎的发育带来不利影响。
二、bcl-2、baX在胎儿宫内发育迟缓患者胎盘中的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、bcl-2、baX在胎儿宫内发育迟缓患者胎盘中的表达（论文提纲范文）
（1）转录因子TWIST1在子痫前期发病中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 研究背景 |
| 第一部分 EOSP患者及体外缺氧模型中滋养细胞凋亡率及TWIST1表达 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 TWIST1在缺氧滋养细胞中的作用 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 凋亡激活剂/抑制剂对TWIST1调节缺氧滋养细胞凋亡的影响 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四部分 TWIST1调节Aspirin和LMWH影响滋养细胞活性和功能的机制 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 论文的创新性及局限性 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表学术论文情况 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文Ⅰ |
| 外文论文Ⅱ |
（2）妊娠母猪补饲外源精胺对胎儿及其主要附属物发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 胎儿主要附属物概述 |
| 1.1 胎盘概述 |
| 1.1.1 胎盘结构和功能 |
| 1.1.2 胎盘的结构发育 |
| 1.1.3 胎盘的血管形成 |
| 1.2 脐带简介 |
| 2 IUGR概述 |
| 2.1 IUGR及其成因 |
| 2.2 IUGR与胎盘血管发育 |
| 2.3 IUGR应对措施 |
| 3 精胺概述 |
| 3.1 精胺介绍及其功能 |
| 3.2 内源精胺的合成与分解 |
| 3.3 精胺在猪生产中的应用 |
| 4 目的与意义 |
| 第二章 试验部分 |
| 第一节 外源精胺对胎盘和胎儿的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物与试验设计 |
| 1.2 试验日粮组成及营养水平 |
| 1.3 样品采集与制备 |
| 1.4 测定指标及方法 |
| 1.4.1 胎盘平均面积 |
| 1.4.2 胎盘平均重量 |
| 1.4.3 胎儿平均体重 |
| 1.5 数据处理与统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 外源精胺对脐带的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物与试验设计 |
| 1.2 样品采集与制备 |
| 1.3 测定指标及方法 |
| 1.3.1 脐带平均长度 |
| 1.3.2 脐带平均外直径 |
| 1.3.3 脐动脉平均外直径 |
| 1.3.4 脐静脉平均外直径 |
| 1.4 数据处理与统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 外源精胺对脐带平均长度和脐带平均外直径的影响 |
| 2.2 外源精胺对脐带血管的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三节 外源精胺对胎盘组织微血管密度的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物与试验设计 |
| 1.2 样品采集与制备 |
| 1.3 主要试剂与仪器 |
| 1.3.1 主要试剂 |
| 1.3.2 主要仪器 |
| 1.4 测定指标及方法 |
| 1.4.1 胎盘组织微血管密度 |
| 1.5 数据处理与统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四节 外源精胺对胎盘组织中血管生成基因与蛋白及细胞凋亡,氧化应激和营养转运基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物与试验设计 |
| 1.2 样品采集与制备 |
| 1.3 主要试剂与仪器 |
| 1.3.1 主要试剂 |
| 1.3.2 主要仪器 |
| 1.4 测定指标及方法 |
| 1.4.1 基因的测定 |
| 1.4.2 蛋白表达的测定 |
| 1.5 数据处理与统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 外源精胺对胎盘组织中血管生成相关基因的影响 |
| 2.2 外源精胺对胎盘组织中血管生成相关蛋白的影响 |
| 2.3 外源精胺对胎盘组织中细胞凋亡相关基因的影响 |
| 2.4 外源精胺对胎盘组织中氧化应激及营养转运相关基因的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 外源精胺对胎盘组织中血管生成相关基因和蛋白表达的影响 |
| 3.2 外源精胺对胎盘组织中细胞凋亡相关基因的影响 |
| 3.3 外源精胺对胎盘组织中氧化应激及营养转运相关基因的影响 |
| 4 小结 |
| 第三章 全文总结与展望 |
| 1 全文总结 |
| 2 本文创新之处 |
| 3 有待进一步解决的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）葡萄糖酸锌对子痫前期样大鼠炎症反应和凋亡的干预作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 PE样大鼠模型建立及葡萄糖酸锌对PE的保护作用 |
| 2.2 各实验组孕鼠胎盘组织中抗氧化剂的水平 |
| 2.3 各实验组孕鼠胎盘组织中氧化损伤水平 |
| 2.4 各实验组孕鼠血清炎症因子的水平 |
| 2.5 各实验组孕鼠胎盘组织中凋亡相关因子的水平 |
| 2.6 各实验组胎鼠的出生结局 |
| 3 讨论 |
| 3.1 L-NAME建立PE模型 |
| 3.2 锌离子拮抗氧化应激 |
| 3.3 葡萄糖酸锌对 PE 模型氧化应激及氧化损伤的影响 |
| 3.4 锌离子拮抗炎症反应 |
| 3.5 葡萄糖酸锌对 PE 模型炎症反应的影响 |
| 3.6 葡萄糖酸锌对PE模型中细胞凋亡的影响 |
| 3.7 PE氧化应激、炎症及凋亡的关系及葡萄糖酸锌的作用 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 子痫前期(PE)与氧化应激及炎症相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（4）骨保护素对宫内发育迟缓大鼠胰岛β细胞增殖的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:宫内生长迟缓大鼠胰腺骨保护素的表达及对胰腺发育的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 试验试剂的配置 |
| 2.2 实验动物及饲料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 建立IUGR大鼠动物模型 |
| 2.3.2 标本采集 |
| 2.3.3 试验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 宫内营养不良对IUGR子鼠生长及胰腺发育的影响 |
| 3.2 宫内营养不良对IUGR子鼠胰岛功能的影响 |
| 3.3 OPG蛋白在IUGR大鼠胰腺中的分布及表达情况 |
| 3.4 OPGmRNA在 IUGR大鼠胰腺中的表达情况 |
| 3.5 胰腺组织中OPG蛋白和m RNA表达与胰腺重量的相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:重组人骨保护素对宫内生长迟缓大鼠胰岛β细胞增殖的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 重组人OPG的配制 |
| 2.2 研究对象和分组 |
| 2.2.1 实验动物及细胞系 |
| 2.2.2 实验动物分组 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 标本采集 |
| 2.3.2 细胞的试验方法 |
| 2.3.3 免疫荧光双染检测胰腺中Ki67 的表达 |
| 2.3.4 ELISA法检测血清胰岛素水平 |
| 2.3.5 胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的计算 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组大鼠各时间点体重及胰腺重量 |
| 3.2 各组大鼠各时间点胰岛β细胞增殖情况 |
| 3.3 各组大鼠各时间点的胰岛功能 |
| 3.4 不同浓度重组人OPG及不同干预时间对INS-1 细胞增殖的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:骨保护素通过PI3K/AKT/FoxO1 信号转导通路促进胰岛β细胞增殖 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.2 研究对象和分组 |
| 2.2.1 实验动物及细胞系 |
| 2.2.2 细胞实验分组 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验动物分组 |
| 2.3.2 CCK-8 检测INS-1 细胞增殖情况 |
| 2.3.3 流式细胞仪检测各种INS-1 细胞周期分布情况 |
| 2.3.4 Annexin-FITC/PI染色细胞凋亡检测 |
| 2.3.5 Western blot检测各组cyclin D、cyclin E、bcl2、bax、AKT、p-AKT、FoxO1、p-FoxO1表达 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 重组人OPG对 INS-1 细胞增殖的影响 |
| 3.2 重组人OPG对 INS-1 细胞周期的影响 |
| 3.3 重组人OPG对 INS-1 细胞凋亡的影响 |
| 3.4 重组人OPG对 PI3K/AKT/FoxO1 通路的影响 |
| 3.4.1 各组INS-1 细胞中AKT、p-AKT、Fox O1、p-FoxO1 及胞浆和胞核内的FoxO1蛋白表达水平 |
| 3.4.2 生后12 周各组大鼠胰腺组织中AKT、p-AKT、FoxO1、p-FoxO1 及胞浆和胞核内的FoxO1 蛋白表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）TGF-β1影响汞诱导绒毛滋养细胞凋亡的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 HgCl_2 诱导绒毛滋养细胞凋亡的研究 |
| 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果和分析 |
| 2.1 HgCl_2 诱导HTR-8/ SVneo滋养细胞凋亡 |
| 2.2 HgCl_2 诱导的HTR-8/SVneo细胞凋亡呈剂量依赖性 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 TGF-β1在HgCl_2 诱导滋养细胞凋亡中作用及机制的研究 |
| 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果和分析 |
| 2.1 TGF-β1 降低了 HgCl_2诱导的 HTR-8 / SVneo 细胞凋亡 |
| 2.2 TGF-β1 处理激活HTR-8/ SVneo滋养细胞TAK1 信号分子 |
| 2.3 p38 MAPK信号通路与TGF-β1 调控的滋养细胞凋亡有关 |
| 2.4 TAK1 表达参与调控HgCl_2 诱导的细胞凋亡 |
| 3 讨论 |
| 3.1 TGF-β1 对人绒毛滋养细胞生物学功能的影响 |
| 3.2 MAPK信号通路对滋养细胞凋亡的影响 |
| 3.3 TGF-β1 通过p38MAPK信号通路调控HgCl_2 诱导的滋养细胞凋亡机制及其与妊娠相关疾病的相关性 |
| 4 结论 |
| 本研究存在的局限性和前景展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（6）链脲佐菌素诱导妊娠期糖尿病大鼠海马PTPRT基因甲基化修饰调控子代学习记忆能力机制的初步探究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 GDM宫内环境改变对子代学习记忆能力的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方案 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 GDM宫内环境影响子代学习能力的关键基因 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5. 结论 |
| 第三部分 PTPRT基因对大鼠海马神经元细胞周期及凋亡的影响和分子机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方案 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四部分 PTPRT基因对CDM子代学习记忆能力作用研究 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.2 实验方案 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 表观遗传调控对子代学习记忆能力的影响 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（7）胎盘组织中CYP1A1表达在孕期香烟烟雾暴露致胎鼠宫内发育迟缓中的作用（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 一、材料 |
| 1. 实验动物: |
| 2. 实验动物分组: |
| 二、方法 |
| 1. 香烟烟雾暴露处理: |
| 2. 动物标本获取: |
| 3. 免疫组织化学染色: |
| 4. 统计学处理: |
| 结果 |
| 一、被动吸烟导致胎鼠宫内发育迟缓: |
| 二、被动吸烟对胎盘中CYP1A1表达量的影响: |
| 三、被动吸烟对胎盘中凋亡相关蛋白表达量的影响: |
| 讨论 |
（8）川续断皂苷Ⅵ调控滋养细胞PR、PSG1及凋亡机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 自然流产的机制研究概况 |
| 一、解剖因素 |
| 二、遗传基因因素 |
| 三、免疫因素 |
| 四、代谢及内分泌因素 |
| 五、血栓形成因素 |
| 第二节 滋养细胞增殖凋亡与自然流产的研究概况 |
| 一、滋养细胞增殖与自然流产 |
| 二、滋养细胞凋亡与自然流产 |
| 三、凋亡与自然流产的研究概况 |
| 四、PI3K/Akt通路在凋亡的作用 |
| 五、孕激素受体(PR)与自然流产的研究概况 |
| 六、妊娠特异性β1 糖蛋白与自然流产的研究概况 |
| 七、米非司酮与滋养细胞凋亡 |
| 八、自然流产模型建立进展 |
| 第三节 中医对自然流产的研究进展 |
| 一、中医对自然流产病因病机认识 |
| 二、中医对自然流产的治疗原则 |
| 三、中医对自然流产的治疗方法 |
| 四、导师对复发性流产的认识及诊治 |
| 五、团队前期研究成果 |
| 六、续断的药理分析及应用进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 立论依据及实验技术路线 |
| 一、立论依据 |
| 二、技术路线 |
| 第二节 临床筛查及验证绒毛组织PR、PSG1 及凋亡的表达差异 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第三节 RU486诱导细胞流产与凋亡模型的建立 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第四节 川续断皂苷Ⅵ对SA模型细胞凋亡的影响 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第五节 PR对滋养细胞PSG1 及凋亡蛋白的调控作用 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结 |
| 第六节 PSG1 对滋养细胞PR及凋亡蛋白的调控作用 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结 |
| 第七节 PR、PSG1对AKT/BCL-2 信号通路的调控作用 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第八节 川续断皂苷Ⅵ调控滋养细胞PR及 PSG1 机制 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（9）ANGPTL4介导PPARγ激活剂在子痫前期病理过程中的保护性作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 第一部分 PPARγ是 rosiglitazone诱导ANGPTL4 表达和分泌所必需的 |
| 1.1.前言 |
| 1.2.实验材料与方法 |
| 1.3.结果 |
| 1.4.讨论 |
| 1.5.参考文献 |
| 第二部分 ANGPTL4是PPARγ直接调控的靶基因 |
| 2.1.前言 |
| 2.2.实验材料与方法 |
| 2.3.结果 |
| 2.4.讨论 |
| 2.5.参考文献 |
| 第三部分 子痫前期患者胎盘组织中PPARγ和ANGPTL4 的表达以及血清中PPARγ循环激活剂的水平和ANGPTL4分泌是减少的 |
| 3.1.前言 |
| 3.2.实验材料与方法 |
| 3.3.结果 |
| 3.4.讨论 |
| 3.5.参考文献 |
| 第四部分 ANGPTL4介导rosiglitazone诱导的滋养细胞生存和增殖 |
| 4.1.前言 |
| 4.2.实验材料与方法 |
| 4.3.结果 |
| 4.4.讨论 |
| 4.5.参考文献 |
| 第五部分 ANGPTL4 对于PPARγ激动剂诱导的滋养细胞的迁移和侵袭以及胎盘外植体的生长是至关重要的 |
| 5.1.前言 |
| 5.2.实验材料与方法 |
| 5.3.结果 |
| 5.4.讨论 |
| 5.5.参考文献 |
| 第六部分 ANGPTL4 参与PPARγ激动剂诱导的血管生成 |
| 6.1.前言 |
| 6.2.实验材料与方法 |
| 6.3.结果 |
| 6.4.讨论 |
| 6.5.参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间的科研成果和获奖情况 |
（10）孕中期热暴露影响胚胎宫内发育中HSP70的作用及其机制的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1.高温对哺乳动物生殖功能的影响 |
| 2. 胚胎着床前期与围着床期热暴露对胚胎生长发育的影响 |
| 3. HSP70的特点 |
| 4. HSP70与热暴露胚胎发育的关系 |
| 第一部分 孕中期热暴露对子代大鼠宫内发育及HSP70、Bax、Bcl-2 表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 孕鼠一般情况及体重变化 |
| 2.2 仔鼠生长发育与胎盘重量的比较 |
| 2.3 胎盘HSP70、Bax、Bcl-2 蛋白表达及血浆HSP70水平的比较 |
| 3 讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 腺病毒介导的HSP70表达对孕中期热暴露子代大鼠宫内发育的影响研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组SD大鼠HSP70腺病毒表达载体及干扰载体的验证结果 |
| 2.2 孕鼠一般情况及体重变化 |
| 2.3 三组胎鼠发育指标与胎盘重量的比较 |
| 2.4 三组胎盘HSP70、Bax、Bcl-2 表达及血浆HSP70水平的比较 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 孕中期热暴露后子宫缺血对子代宫内发育的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 孕鼠一般情况及体重变化 |
| 2.2 三组胎鼠发育指标与胎盘重量的比较 |
| 2.3 三组胎盘HSP70、Bax、Bcl-2 表达及循环HSP70水平的比较 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结与展望 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
四、bcl-2、baX在胎儿宫内发育迟缓患者胎盘中的表达（论文参考文献）
- [1]转录因子TWIST1在子痫前期发病中的作用及其机制研究[D]. 马丽娟. 山东大学, 2020(12)
- [2]妊娠母猪补饲外源精胺对胎儿及其主要附属物发育的影响[D]. 高山. 江西农业大学, 2020(07)
- [3]葡萄糖酸锌对子痫前期样大鼠炎症反应和凋亡的干预作用[D]. 田梦然. 桂林医学院, 2020(03)
- [4]骨保护素对宫内发育迟缓大鼠胰岛β细胞增殖的影响及机制研究[D]. 唐诗. 中国医科大学, 2019(04)
- [5]TGF-β1影响汞诱导绒毛滋养细胞凋亡的研究[D]. 周桂菊. 安徽医科大学, 2019(07)
- [6]链脲佐菌素诱导妊娠期糖尿病大鼠海马PTPRT基因甲基化修饰调控子代学习记忆能力机制的初步探究[D]. 韩璐阳. 浙江大学, 2019(03)
- [7]胎盘组织中CYP1A1表达在孕期香烟烟雾暴露致胎鼠宫内发育迟缓中的作用[J]. 蔡恒,李智文,滕佩宏,贾童童,王越,张永镇,于向民,王东. 中国生育健康杂志, 2019(01)
- [8]川续断皂苷Ⅵ调控滋养细胞PR、PSG1及凋亡机制研究[D]. 杜鑫. 广州中医药大学, 2018
- [9]ANGPTL4介导PPARγ激活剂在子痫前期病理过程中的保护性作用[D]. 刘磊. 上海交通大学, 2018(01)
- [10]孕中期热暴露影响胚胎宫内发育中HSP70的作用及其机制的初步研究[D]. 彭永保. 南昌大学, 2017(12)