一、猪瘟抗体免疫金标试纸（论文文献综述）
王一鹏[1]（2019）在《TGEV单克隆抗体及抗原检测胶体金试纸条的制备》文中认为猪传染性胃肠炎（Porcine transmissible gastroenteritis,TGE）是猪的一种急性、高度接触性肠道传染病。该病由猪传染性胃肠炎病毒（TGE virus,TGEV）引起,以严重的呕吐、腹泻及2周内仔猪高死亡率为特征。TGE与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪Delta冠状病毒及猪轮状病毒等引起的临床症状相似,临床鉴别诊断困难。胶体金免疫层析试纸具备适合兽医临床快速诊断,特异性高、操作简单等特点。已知TGEV N蛋白是TGEV抗原和抗体检测方法研究的重要靶蛋白。因此,本研究以N蛋白为靶蛋白,制备单克隆抗体,研制快速检测TGEV抗原的胶体金免疫层析试纸,旨在为TGE的快速诊断与防治提供重要技术支撑。本研究以弗氏佐剂乳化的重组TGEV N蛋白免疫3只雌性BALB/c小鼠,共免疫3次,间隔2周。第3次免疫后10天,经ELISA检测3只小鼠的血清特异性抗体效价在1:102401:20480之间,选取抗体效价为1:20480的小鼠于融合前用N蛋白进行腹腔冲击免疫。冲击免疫后第3天取小鼠脾细胞与杂交瘤细胞进行细胞融合,通过ELISA筛选分泌TGEV N蛋白特异性抗体的阳性孔。阳性孔经过3次亚克隆后,最终获得了4株分泌TGEV N蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株,分别命名为2F5、1G11、1F12、1B10。Western blot鉴定显示,4株McAb均能够与TGEV N蛋白特异性结合。免疫过氧化物酶单层试验鉴定显示,4株单抗均能够与感染PK15细胞内的TGEV特异性结合。4株杂交瘤细胞分泌的抗体均为IgG1亚类和Kappa链（IgG1κ）。进而将4株杂交瘤细胞腹腔注射给10周龄的雌性BALB/c小鼠,制备了4株单抗的腹水,经ELISA检测腹水抗体效价分别为1:655360、1:655360,1:1310720、1:655360。同时,以弗氏佐剂乳化的N蛋白免疫2只健康新西兰大耳白兔制备了抗N蛋白多克隆抗体,经过3次免疫后,ELISA抗体效价>1:105,经Western blot鉴定,其能够与TGEV N蛋白和TGEV特异性结合。进而以小鼠单抗纯化试剂盒纯化后的2F5单克隆抗体作为检测线（3 mg/mL）,以经饱和硫酸铵沉淀法和DEAE-纤维素层析法提取和纯化的兔抗TGEV N多克隆抗体（150μg/mL,pH 8.0）作为金标抗体,以羊抗兔IgG（1 mg/mL）作为质控线,组装试纸条。将该试纸条能够特异地与TGEV N蛋白反应,能够检测到TGEV N蛋白的最低浓度为3.125μg/mL。试纸条与猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸病毒等无交叉反应。最后用组装的试纸条和RT-PCR检测15份临床腹泻仔猪的小肠及内容物,试纸条与RT-PCR的阳性检出率分别为20.0%（3/15）和26.7%（4/15）,两者的符合率为93.33%。该结果表明,初步制备的基于TGEV N蛋白单克隆抗体的胶体金免疫层析抗原检测试纸条能够快速、特异地检测临床样本中的TGEV,可用于TGE的现场诊断。
孙亚宁,王丽,王栋,杨苏珍,陈鑫鑫,刘亚伟,张立林,邓瑞广,张改平[2]（2019）在《猪瘟抗体检测试纸研发及制备工艺的优化》文中进行了进一步梳理为研制灵敏、准确、稳定的猪瘟抗体检测试纸,对胶体金标记猪瘟病毒（CSFV）Erns-E2蛋白的pH、封闭液、保存液及样品垫等试纸生产各环节的保护剂、稳定剂及缓冲系统进行优化,确定猪瘟抗体检测试纸生产的工艺参数,使试纸的准确性、灵敏度及稳定性满足批量生产要求。该试纸在室温干燥条件下可稳定保存1a以上,为实现猪瘟抗体检测试纸的商业化及广泛应用奠定基础。
林小英,沈育华,沈永栋,游根勇,郭书林,黄印尧[3]（2012）在《金标试纸在猪场疫病防控上的应用》文中进行了进一步梳理金标试纸具有微量、准确、快速、操作简便、结果直观、容易判定、成本低的优点,可作为疫苗质量的检测、抗体水平的普查、免疫程序的制定、疫病诊断和猪瘟净化的检测试剂。
张习本,欧茂均,叶红英,李霞[4]（2012）在《毕节地区集约化饲养和散养猪猪瘟抗体水平低下的原因分析》文中进行了进一步梳理通过制定科学合理的免疫程序和对基层防疫员培训后,利用免疫金标试纸条对毕节地区9个县市部分规模养猪场和散养农户398份血清进行猪瘟免疫抗体检测,结果表明,本次猪瘟免疫抗体效价平均合格率达88.3%,超过国家猪瘟免疫抗体合格率70%的标准,免疫效果较好。但也有部分猪场少数猪猪瘟抗体水平低下,不足以抵抗强毒侵袭而发病或成为隐性带毒猪,威胁其它易感猪群。
郭书林,龚艳清,黄印尧[5]（2012）在《应用免疫金标试纸开展种猪群猪瘟净化》文中研究指明猪瘟是一种急性、烈性、毁灭性、病毒性传染病近年来随着免疫抑制性病毒病的流行,尤其是圆环病毒、蓝耳病毒对猪群造成很大的威胁,病毒抑制了猪机体的免疫器官功能,造成猪只注射了猪瘟疫苗产生不了对应性的免疫抗体,造成猪瘟的暴发和流行。从最近厦门地区许多猪场求诊的病例分析,大多数猪群都因感染了圆环病毒、蓝耳病毒,也最终暴
金颜辉,夏晓红,许先明,杨佳,吴波平,严乾临,林芬,巴雷[6]（2009）在《狂犬病免疫抗体胶体金检测试纸法的建立及其应用》文中提出在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,检测线侧贴有金标抗体玻璃纤维膜结合垫,质控线侧贴有吸水垫,其中检测线包被的是纯化的狂犬病毒抗原,质控线包被的是兔抗狂犬病毒IgG,玻璃纤维膜结合垫上喷有胶体金标记的纯化的狂犬病毒抗原。检测时,取被检测犬的少量血清,滴在该试纸条的样品孔里,经过20分钟的层析作用,观察检测线和质控线的颜色,确定犬体内是否产生了有效的保护性抗体。本方法为一步检测法,具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速、无需专门仪器设备、出结果快等特点。
黄江山,张孟璋,陈仲德,黄亚萍,张长弓,黄印尧[7]（2009）在《狂犬病抗体免疫金标检测试纸的研制》文中研究说明目的应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,研制狂犬病抗体免疫金标检测试纸。方法采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记狂犬病抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被狂犬病抗原和兔抗狂犬病抗体,制成狂犬病抗体免疫金标检测试纸（人用）。结果当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色。整个试验过程只需15 m in。试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点。结论应用胶体金免疫层析技术建立的"狂犬病抗体免疫金标检测试纸",可以准确地检测出被检样品是否带有狂犬病抗体,同时还可以通过检测线颜色的深浅判定抗体的含量高低。
熊同舟,刘春笋,蔡先强,姜廷树,郑巧[8]（2009）在《免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比》文中提出当前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法、猪瘟正向间接血凝法以及免疫金标试纸检测法。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点,但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员,且检测时间较长。而金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法,检测一个样品只需8～15min,操作简便、快速、直观、结果容易判定,但其应用检测结果的准确性尚待求证。鉴于这种情况,开展了免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验两种检测方法的比较研究[1]。结果表明,免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合,试验结果可靠。
黄江山,张孟璋,陈仲德,黄亚萍,孔繁德,张长弓,黄印尧[9]（2008）在《狂犬病抗体免疫金标检测试纸(人用)的研制》文中提出应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记狂犬病抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被狂犬病抗原和兔抗狂犬病抗体,制成狂犬病抗体免疫金标检测试纸。当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色。整个试验过程只需15min。试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点。
张长弓,黄印尧,郑海明,方莹,孔繁德,沈浩龙,何琼,黄雅萍,文芳[10]（2007）在《猪瘟病毒抗原胶体金快速检测试纸的研究》文中进行了进一步梳理应用胶体金标记技术（Immunogold Labelling Technique）与免疫层析技术相结合,在玻璃纤维膜、硝酸纤维膜的检测线（T）和对照线（C）上分别喷上胶体金与猪瘟（CSF）单克隆抗体（Ab2）的偶联物、CSF单克隆抗体（Ab2）和羊抗鼠IgG多克隆抗体,制成检测CSF抗原的"猪瘟抗原胶体金快速检测试纸"。用该试纸检测"猪瘟弱毒活疫苗"和猪瘟脾淋弱毒苗均显阳性,而对猪源性的其它病毒、细菌抗原均显阴性。经临床测试,该试纸具有微量、特异、快速、简便和结果容易判定的优点,可作为检测猪瘟抗原的一种新试剂。
二、猪瘟抗体免疫金标试纸（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪瘟抗体免疫金标试纸（论文提纲范文）
（1）TGEV单克隆抗体及抗原检测胶体金试纸条的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 猪传染性胃肠炎概述 |
| 1.1.1 流行特点 |
| 1.1.2 临床症状与病理变化 |
| 1.2 猪传染性胃肠炎病毒 |
| 1.2.1 基本生物学特征 |
| 1.2.2 分子生物学特征 |
| 1.3 实验室检测技术 |
| 1.3.1 病毒的分离鉴定 |
| 1.3.2 免疫荧光技术 |
| 1.3.3 酶联免疫吸附试验 |
| 1.3.4 聚合酶链式反应 |
| 1.4 疫苗 |
| 1.4.1 灭活疫苗 |
| 1.4.2 弱毒活疫苗 |
| 1.4.3 基因工程疫苗 |
| 1.5 防治 |
| 1.6 胶体金免疫层析技术 |
| 1.6.1 胶体金的特性及制备 |
| 1.6.2 免疫胶体金的制备 |
| 1.6.3 胶体金免疫层析技术的应用 |
| 1.7 研究的目的及意义 |
| 1.8 研究内容与技术路线 |
| 1.8.1 研究内容 |
| 1.8.2 技术路线 |
| 1.9 研究的目标 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 单克隆抗体制备用材料 |
| 2.1.2 胶体金免疫层析试验方法建立用材料 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 TGEV单克隆抗体的制备 |
| 2.2.2 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的制备与纯化鉴定 |
| 2.2.3 TGEV抗原检测胶体金试纸条的制备 |
| 3 结果 |
| 3.1 纯化的TGEV N蛋白 |
| 3.2 TGEV及其TCID50 |
| 3.3 TGEV抗体检测间接ELISA方法 |
| 3.4 融合前小鼠抗TGEV N蛋白血清抗体效价 |
| 3.5 细胞融合与获得的杂交瘤细胞株 |
| 3.6 单克隆抗体的类型 |
| 3.7 单克隆抗体的抗原识别表位 |
| 3.8 单克隆抗体的免疫活性 |
| 3.9 单抗2F5 能够与TGEV特异性结合 |
| 3.10 单克隆抗体的效价 |
| 3.11 纯化腹水的SDS-PAGE |
| 3.12 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的效价 |
| 3.13 兔抗N蛋白多克隆抗体的免疫活性 |
| 3.14 胶体金标记多抗的最适pH值 |
| 3.15 胶体金标记TGEV多抗的最适浓度 |
| 3.16 检测线与质控线的工作浓度 |
| 3.17 试纸条的特异性鉴定 |
| 3.18 试纸条的敏感性检测 |
| 3.19 临床应用 |
| 4 讨论 |
| 4.1 重组TGEV N蛋白免疫抗原的制备及应用 |
| 4.2 TGEV N蛋白单克隆抗体的制备 |
| 4.3 金标抗体和检测用抗体的选择 |
| 4.4 TGEV抗原检测试纸条的问题 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（2）猪瘟抗体检测试纸研发及制备工艺的优化（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂耗材 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 胶体金制备及鉴定 |
| 1.2.2 胶体金标记Erns-E2重组蛋白 |
| 1.2.3 检测膜制备 |
| 1.2.4 样品垫制备 |
| 1.2.5 试纸组装与切割 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 胶体金质量鉴定 |
| 2.2 胶体金标记Erns-E2重组蛋白条件确定 |
| 2.3 金标蛋白保存液 |
| 2.4 金标蛋白垫制备 |
| 2.5 检测膜的制备 |
| 2.5.1 检测线 (T线) 的制备 |
| 2.5.2 质控线 (C线) 的制备 |
| 2.6 样品垫的制备 |
| 2.7 试纸稳定性 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（3）金标试纸在猪场疫病防控上的应用（论文提纲范文）
| 1 金标检测试纸 |
| 1.1 金标法的原理 |
| 1.2 免疫金标试纸的制作方法 |
| 1.3 操作方法和判定标准 |
| 1.3.1 操作方法 |
| 1.4 金标法与其他检测法的比较 |
| 2 免疫金标试纸在猪场疫病防控上的应用 |
| 2.1 选择适合本场使用的疫苗 (即检验购买的疫苗的质量) |
| 2.3 制定正确的免疫程序 |
| 2.4 猪场猪瘟净化 |
| 2.4.1 操作方法 |
| 2.4.2 净化结果判定 |
| 2.5 为疫病诊断提供依据 |
| 3 小结 |
（4）毕节地区集约化饲养和散养猪猪瘟抗体水平低下的原因分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果判定 |
| 2 结果与分析 |
| 3 小结 |
（5）应用免疫金标试纸开展种猪群猪瘟净化（论文提纲范文）
| 1 免疫金标试纸检测猪瘟抗体 |
| 2 操作方法和判定标准 |
| 2.1 采血取血清 |
| 2.2 操作方法 |
| 2.3 判定标准 |
| 3 猪瘟净化结果判定 |
| 4 小结与讨论 |
（6）狂犬病免疫抗体胶体金检测试纸法的建立及其应用（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 抗原 |
| 1.2 兔狂犬病病毒免疫抗体 |
| 1.2.1 兔狂犬病病毒免疫血清的制备 |
| 1.2.2 兔抗狂犬病病毒病Ig G抗体的提纯 |
| 1.3 犬阴阳性血清 |
| 1.4 待检血清 |
| 1.5 其它实验材料 |
| 1.6 对照试剂 |
| 1.7 主要仪器 |
| 1.8 玻璃器 |
| 2 方法与步骤 |
| 2.1 金标检测试纸的制作方法 |
| 2.1.1 犬病毒抗原的提纯 |
| 2.1.2 胶体金的制备 |
| 2.1.3 胶体金标记物的制备 |
| 2.1.4 待标记狂犬病毒抗原的准备 |
| 2.1.5 狂犬病毒抗原的胶体金标记 |
| 2.1.6 胶体金标记的纯化 |
| 2.1.7 |
| 2.1.8 |
| 2.1.9 |
| 2.1.1 0 NC膜包被 |
| 2.1.1 1 胶体金试纸条的装配 |
| 2.2 检测方法和判断标准 |
| 2.3胶体金试纸条的鉴定 |
| 3 结果 |
| 3.1 狂犬病毒抗原标记条件 |
| 3.2 NC膜的包被 |
| 3.2.1 NC膜的选择 |
| 3.2.2 NC膜条件主要控制湿度和包被液 |
| 3.3 胶体金试纸条的鉴定结果 |
| 3.4 待检血清样品检测 |
| 3.4.1 敏感性试验 |
| 3.4.2 重复性试验 |
| 4 讨论与分析 |
| 4.1 |
| 4.2 稳定剂的选择 |
| 4.3 NC膜的包被 |
| 4.4 |
（7）狂犬病抗体免疫金标检测试纸的研制（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 狂犬病抗原: |
| 1.1.2 狂犬病抗体快速检测试纸的制备 |
| (1) 胶体金的制备: |
| (2) 胶体金的标记: |
| (3) 冷冻干燥: |
| (4) 抗原、抗体包被: |
| (5) 试纸的组装: |
| 1.1.3 对比检测试剂: |
| 1.1.4 检测样品 |
| (1) 检测血清样品: |
| (2) 对照血清: |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 检测方法: |
| 1.2.2 判定标准: |
| (1) 无效: |
| (2) 阴性: |
| (3) 阳性: |
| 2 结 果 |
| 2.1 特异性检测 |
| 2.2 准确性 (敏感性) 检测 |
| 2.3 线性 (敏感性) 比较 |
| 2.4 全血与血清检测结果 |
| 3 讨 论 |
| 3.1 制作原理 |
| 3.2 特异性试验 |
| 3.3 准确性和敏感性试验 |
| 3.4 全血检测 |
（8）免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（10）猪瘟病毒抗原胶体金快速检测试纸的研究（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 CSF检测试纸的制作 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.2 对比检测试剂 |
| 1.3 检测样品 |
| 1.3.1 已知标准抗原 |
| 1.3.2 阳性样品 |
| 1.4 检测方法 |
| 1.5 判定标准的设定 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 特异性检测 |
| 2.1.1 方法 |
| 2.1.2 结果 |
| 2.2 准确性检测 |
| 2.2.1 方法 |
| 2.2.2 结果 |
| 2.3 线性 (敏感性) 检测 |
| 3 小结与讨论 |
| 3.1 制作原理 |
| 3.2 特异性强 |
| 3.3 准确率高 |
| 3.4 线性好 |
四、猪瘟抗体免疫金标试纸（论文参考文献）
- [1]TGEV单克隆抗体及抗原检测胶体金试纸条的制备[D]. 王一鹏. 河北农业大学, 2019(01)
- [2]猪瘟抗体检测试纸研发及制备工艺的优化[J]. 孙亚宁,王丽,王栋,杨苏珍,陈鑫鑫,刘亚伟,张立林,邓瑞广,张改平. 西北农业学报, 2019(02)
- [3]金标试纸在猪场疫病防控上的应用[J]. 林小英,沈育华,沈永栋,游根勇,郭书林,黄印尧. 福建畜牧兽医, 2012(06)
- [4]毕节地区集约化饲养和散养猪猪瘟抗体水平低下的原因分析[J]. 张习本,欧茂均,叶红英,李霞. 当代畜牧, 2012(01)
- [5]应用免疫金标试纸开展种猪群猪瘟净化[J]. 郭书林,龚艳清,黄印尧. 福建畜牧兽医, 2012(01)
- [6]狂犬病免疫抗体胶体金检测试纸法的建立及其应用[J]. 金颜辉,夏晓红,许先明,杨佳,吴波平,严乾临,林芬,巴雷. 中国动物检疫, 2009(12)
- [7]狂犬病抗体免疫金标检测试纸的研制[J]. 黄江山,张孟璋,陈仲德,黄亚萍,张长弓,黄印尧. 中国自然医学杂志, 2009(04)
- [8]免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比[J]. 熊同舟,刘春笋,蔡先强,姜廷树,郑巧. 湖北畜牧兽医, 2009(08)
- [9]狂犬病抗体免疫金标检测试纸(人用)的研制[A]. 黄江山,张孟璋,陈仲德,黄亚萍,孔繁德,张长弓,黄印尧. 第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集, 2008
- [10]猪瘟病毒抗原胶体金快速检测试纸的研究[J]. 张长弓,黄印尧,郑海明,方莹,孔繁德,沈浩龙,何琼,黄雅萍,文芳. 福建畜牧兽医, 2007(06)